毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

摘要: 【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33 (och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。     

毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除毕赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33(och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。     

中国西南地区叉苔科的订正

本文对我国西南地区叉苔科(Metzgeriaceae)进行了订正,共计2属7种、1亚种、1变种。对西藏、横断山脉及邻区标本作了研究,把喜马拉雅叉苔Metzgeria himalayensis Kashyap并于平叉苔日本亚种M. conjugata subsp. japonica(Hatt.)Kuwah.;把中华叉苔M. sinensis Chen作为狭尖叉苔M. consanguinea Schiffn.的异名。我国东北记载的长梗毛叉苔Apometzgeria longifrondis(Gao)Chang根据其特征,应归于毛叉苔细肋变种A. pubescens(Schrank)Kuwah. var. kinabaluensis Kuwah.本文还报道2个中国新分布种:蓝叉苔M. darjeelingensis Kuwah.背胞叉苔M. novicrassipilis Kuwah.     

国产丝瓜藓属（真藓科）两新种

报道了我国丝瓜藓属Pohlia两新种,即产自云南的明齿丝瓜藓 P．hyaloperistoma Zhang,Li &; Higuchi和产自西藏的疏叶丝瓜藓P．macrocarpa Zhang,Li&;Higuchi。前者主要特征为蒴齿透明无疣,后者孢子体大型且雌雄异株。     

中国蔓藓科两新种和五新分布种

报道我国蔓藓科植物2新种：云南灰气藓Aerobryopsis yunnanensis X.J.Li et D.C.Zhang,sp.nov.芒叶灰气藓Aerobryopsis aristifolia X.J.Li,S.H.Wu et D.C.Zhang,sp.nov.以及5个新记录：波叶毛扭藓Aerobryidium crispifolium (Broth.et Geh.)Fleisch,ex Broth,膜叶灰气藓Aerobryopsis membranacea(Mitt.Broth.纤细灰气藓Aerobryopsis subleptostigmata Broth.et Par.,卷叶悬藓Barbella convolvens(Mitt.)Broth,斯氏悬藓Barbella stevensii(Ren.et Card.)Fleisch.ex Broth.     

直齿藓属一新组一新种

报道真藓科直齿藓属一新种,具边直齿藓Ｏ．ｂｉｌｉｍｂａｔｕｍＸ．Ｊ．Ｌｉ ｅｔＤ．Ｃ．Ｚｈａｎｇ。本种主要特征（１）蒴齿双层,内齿长,狭线形,无基膜。（２）叶边缘明显分化,具２￣３列狭长细胞,除近尖部和基部边缘外,明显两层。（３）叶细胞明显宽于本属各种（宽达１８￣２４μｍ）。（４）蒴盖短圆锥形,无长喙状尖;本种介于Ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｉｕｍ与Ｏｒｔｈｏｄｏｎｔｏｐｓｉｓ两属之间,根据蒴齿双层之重要特     

旅游环境系统研究进展与展望

旅游环境系统是旅游发展的基础,其协调性与完整性对旅游目的地的可持续发展具有重要推动作用。旅游环境系统具有复杂性、动态性与综合性,对人地关系的关注与研究为改善旅游环境系统的功能提供了科学依据,对旅游环境系统的研究体现了众多学者对旅游可持续发展领域达成的科学共识。文章从旅游环境系统的内涵、指标体系、量化模型、管理工具、应用研究等角度,对国内外学者的旅游环境系统的研究现状分析;根据其研究的不足,提出旅游环境系统研究展望,以期对提升旅游环境系统质量的进一步研究提供理论参考。