炭疽水肿因子在大肠杆菌中高效表达及一步法纯化

【目的】本研究旨在建立一种简单快捷的炭疽水肿因子(EF)重组表达及纯化方法。【方法】构建GST-EF融合表达载体,基于EF基因的密码子使用偏好,选择菌株Escherichia coli BL21-Codon Plus(DE3)-RIL为表达宿主,对EF进行诱导表达;细胞透性技术分离粗蛋白,进而利用亲和层析一步法纯化EF;Native-PAGE、竞争性抑制实验及c AMP浓度分析用于鉴定EF的生物活性。【结果】实现了EF可溶性高效表达,透性化处理可有效抽提可溶性重组蛋白;利用亲和层析一步法纯化得到了纯度达96%的EF;EF可与保护性抗原(PA)结合形成水肿毒素,该毒素能够急剧提高CHO-K1细胞中c AMP的浓度。【结论】本研究建立了一种高效快速制备具有生物活性的炭疽水肿因子的方法,为炭疽相关研究工作提供了新的选择。     

丙酮酸对细胞寒冷应激损伤的保护作用研究

目的:细胞冻存、移植器官保存过程中,机体细胞会产生细胞寒冷应激过程,导致细胞产生损伤作用,而其作用机制尚不清楚,本研究通过观察4℃冷暴露对HEK293细胞增殖活性及凋亡的影响,分析线粒体分裂蛋白Drp1在此过程中的表达变化,阐明Drp1在细胞寒冷应激中作用及其机制.方法:采用MTT法观察4℃环境暴露对HEK293细胞损伤的影响,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测蛋白Drp1、Bcl2表达水平变化,提取线粒体观察线粒体中Drp1表达水平.结果:4℃冷暴露抑制HEK293细胞增殖(P＜0.05),Drp1线粒体表达水平增高,并向线粒体转位;丙酮酸可以逆转4℃冷暴露对细胞增值抑制,抑制Drp1线粒体表达水平增高,并向线粒体转位,增加细胞中Bcl2表达水平.结论:研究发现细胞寒冷应激可以使细胞凋亡,细胞增殖出现显著抑制,而寒冷应激引起细胞Drp1的线粒体转位,丙酮酸干预后可以对细胞起到保护作用,研究发现丙酮酸可以逆转Drp1的线粒体转位过程,增加Bcl2表达水平,可能是其产生保护作用的机制之一.     

冠状动脉微循环障碍及微血管型心绞痛的治疗现状

10%到30%的胸痛患者并无明显的冠状动脉病变(coronary artery disease,CAD),但50%到65%患者的细小冠状动脉血管舒张功能受损,发生冠状动脉微循环障碍(coronary microvascular dysfunction,CMD),即微血管型心绞痛(microvascular angina,MA),目前尚无针对MA的最佳治疗方案。本文综述了既往7篇微血管型心绞痛的治疗方案的临床研究结果,提示西地那非,喹那普利,雌激素和经皮脊髓电刺激对本病有一定的治疗效果,但并未发现L-精氨酸,多沙唑嗪,普伐他丁和地尔硫卓对本病有明确疗效。然而,这7篇研究对冠状动脉微循环障碍的定义不同、采用的治疗方案和效果评价指标存在较大差异,纳入的样本量较小,这些都严重影响了临床研究结果的可靠性。在将来的相关临床试验中需统一冠脉微循环障碍的定义,评估无阻塞性冠脉病变所致胸痛的冠脉微循环障碍以及相应的治疗效果。