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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染家猪和野猪引起的一种高致病性传染病,家猪感染ASFV强毒株后死亡率接近100%.为了研究ASFV的致病机制,利用绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因构建重组病毒已经广泛应用,但易于定量检测且适用于高通量筛选的重组ASFV目前没有报道.本研究以ASFVHLJ/18分离株为亲本病毒,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术和同源重组技术将表达Gaussia荧光素酶(Gluc)和EGFP的报告基因表达盒插入到ASFV的K145R基因的位置,构建可以同时表达Gluc和EGFP的重组ASFV(rASFV-Gluc-EGFP).通过PCR鉴定、Gluc和EGFP表达的检测,确定获得的重组ASFV能够感染猪肺泡巨噬细胞且表达Gluc和EGFP.对构建的重组病毒和亲本病毒进行生长曲线比较,结果表明插入的报告基因不影响病毒在猪肺泡巨噬细胞中的复制.F5、F10和F15代重组病毒基因鉴定和报告基因表达检测结果表明,重组病毒能稳定表达插入的双报告基因.本研究成功构建了表达Gluc和EGFP的重组ASFV,可以针对报告基因进行定量检测和高通量筛选,为ASFV的感染和致病机制研究奠定坚实的基础. 相似文献
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磁处理水防止大鼠早期动脉粥样硬化的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
用磁处理水防止大鼠实验性早期动脉粥样硬化的研究表明,130mT磁处理水有明显升高血清总脂、HDL2胆固醇含量和肾上腺维生素C含量的作用。而150mT磁处理水上述三种升高作用更为显著,同时还有降低血清总胆固醇和HDL3胆固醇含量的作用。两种磁处理水都具有防止主动脉内皮细胞损伤的效应,其中150mT磁处理水的这种预防作用更为显著。 相似文献
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