来源于铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)所产蛋白酶PT121克隆表达及其在小肽合成上的应用

【目的】基于前期筛选到的P.aeruginosa PT121所产有机溶剂耐受性蛋白酶,本研究对该蛋白酶进行克隆表达,研究了重组蛋白的酶学性质及小肽合成上的应用。【方法】参考文献中报道的相似蛋白酶pseudolysin设计引物从菌株PT121基因组中克隆到耐有机溶剂蛋白酶PT121基因las B。构建诱导表达重组质粒p ET22b-las B,于大肠杆菌中进行表达。考察蛋白酶PT121酶学性质及小肽合成上的应用。【结果】序列分析表明las B基因编码信号肽、前肽及成熟肽3个部分,成熟肽部分含有301个氨基酸,分子量约33 k Da,属于金属蛋白酶M4家族。通过破碎条件优化,一步法制备得到较为纯净的重组蛋白酶PT121,其比活力达7700 U/mg,该酶呈现了较高的热稳定性,p H稳定性及溶剂耐受性,与野生菌P.aeruginosa PT121所产蛋白酶性质一致。在50%DMSO体系中高效催化合成了多种小肽,其中阿斯巴甜前体(Cbz-Asp-Phe-NH2)产率高达91%。【结论】蛋白酶PT121基因在大肠杆菌中克隆表达为进一步研究相关催化机理及分子改造奠定了基础。     

酶的定向进化研究及其在工业生物催化中的应用

综合概括了各种蛋白质改造与微生物代谢途径改造的非理性定向进化技术的原理、特点,介绍了这些技术在高性能工业生物催化剂改造中的应用。     

低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物CA12-5、CA19-9在肺癌诊断中的临床应用价值

摘要 目的：探讨低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物糖类抗原（CA）12-5、CA19-9在肺癌诊断中的临床应用价值。方法：选择2019年1月至2021年12月在我院经低剂量螺旋CT检查发现肺部病灶的患者86例,以病理诊断结果分为肺癌组49例、肺部良性病变组37例,另选取同期健康体检志愿者30例作为对照组。观察肺癌的低剂量螺旋CT影像学特征,检测比较各组血清肺癌自身抗体[p53、SOX区域Y相关HMG蛋白家族成员2（SOX2）、G抗原7（GAGE7）、RNA解旋酶自身抗体4-5（GBU4-5）]及CA12-5、CA19-9水平,并对比阳性表达情况,分析低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、CA12-5、CA19-9对肺癌的诊断价值。结果：49例肺癌患者经低剂量螺旋CT检查共发现51个病灶,其中实性结节或部分实性结节30个,非实性结节21个;病灶平均直径（10.92±1.17）mm,＜5 mm者9个,5～10 mm者17个,≥10 mm者25个;11个病灶伴有钙化,16个病灶有毛刺征,20个病灶有分叶征;有6例表现为空洞,空洞通常壁薄厚不均匀,呈中心性或偏心性。肺癌组血清p53、SOX2、GAGE7、GBU4-5及CA12-5、CA19-9水平均明显高于肺部良性病变组和对照组,肺部良性病变组上述指标水平均明显高于对照组（P<0.05）。肺癌组CA12-5、CA19-9、4项肺癌自身抗体单独及联合的阳性率均明显高于肺部良性病变组和对照组（P<0.05）,肺部良性病变组CA12-5、CA19-9及4项肺癌自身抗体联合的阳性率高于对照组（P<0.05）。低剂量螺旋CT联合4项肺癌自身抗体、CA12-5、CA19-9对肺癌诊断的灵敏度为91.84%,特异度为97.30%,准确度为94.19%。结论：低剂量螺旋CT联合肺癌自身抗体、肿瘤标志物CA12-5、CA19-9在肺癌诊断中有较好的临床应用价值。