HPLC法同时测定人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2

目的:建立高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2的方法.方法:采用ODSC18(4.6 mm×150 mm)色谱柱,流动相乙腈-0.05%磷酸水,梯度洗脱,流速1 Ml/min,检测波长203 nm,柱温35 ℃.结果:人参皂苷Rb1、Rc、Rd、Rg3、CK和Rh2分离效果良好,线性关...     

D-核糖生产菌的原生质体诱变及其发酵培养

目的:筛选出莽草酸、转酮醇酶双重营养缺陷型的D-核糖生产菌枯草芽胞杆菌,以提高D-核糖的产量。方法:采用化学诱变剂乙基磺酸甲烷(EMS)对野生型D-核糖生产菌的原生质体进行诱变,并从D-核糖合成途径对发酵培养基进行优化设计。结果:摇瓶发酵D-核糖平均产量为52.2g/L;获得的B.sems-10菌株具有良好的遗传稳定性,D-核糖产量高达67.5g/L。结论:通过对D-核糖生产菌原生质体的EMS诱变,筛选出了高产、遗传性状稳定的营养缺陷型B.sems-10菌株,为进一步提高产量奠定了基础。     

甲醇诱导条件和方式对乙肝表面抗原产率的影响

发酵条件是影响汉逊酵母表达乙肝表面抗原的重要因素,通过对甲醇诱导浓度、方式及诱导周期的调控,研究了不同发酵条件对汉逊酵母表达乙肝表面抗原的影响。结果表明：控制甲醇流加速率15ml／h、甲醇诱导周期40h有利于发酵过程中乙肝表面抗原产率的提高。在发酵末期,细胞浓度最高达410mg／ml,抗原水平达46mg/l。     

口蹄疫抗原决定簇融合基因转化生菜及表达

以3-5天苗龄的散叶大速生生菜(Lactuca sativa var.capatata)无菌苗子叶为外植体,通过根癌农杆菌介导,将携带O型和A型口蹄疫抗原决定簇融合基因O21-O14-A21-HBcAg导入生菜.研究结果表明,含有20 mg·L-1潮霉素(Hyg)的S2培养基(MS 1.5 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1IAA 20 mg·L-1Hyg 300 mg·L-1Cb)为子叶外植体转化后诱导愈伤和芽再生的最适培养基,经抗性筛选,将抗性芽切下于S3培养基(1/2MS 20 mg·L-1Hyg)上诱导生根.通过PCR和Southern杂交分析证明,基因已经整合到生菜基因组中.RT-PCR检测初步表明,O21-O14-A21-HBcAg基因可以在生菜中正常转录.     

生菜遗传转化体系的建立及转基因研究

以散叶生菜大速生(Lactuca sativavar.capatataL.)为试材,以MS为基本培养基,采用不同激素配比,确定生菜高效诱芽培养基为MS 1.5mg/L6-BA 0.2mg/LIAA;抗生素敏感性试验表明,筛选培养基中适宜的潮霉素选择压为20mg/L,抑菌剂羧苄青霉素的适宜质量浓度为300mg/L;通过根癌农杆菌介导的叶盘法将携带O型和A型口蹄疫抗原决定簇融合基因O21-O14-A21-HBcAg转入大速生散叶生菜,对部分抗性植株进行PCR和PCR-Southern杂交检测,证实目的基因已经成功整合到生菜基因组中。RT-PCR检测初步表明,O21-O14-A21-HBcAg基因可以在生菜中正常转录表达。     

氨茶碱与柠檬酸盐协同作用促进环磷酸腺苷发酵生产

目的: 探究通过抑制磷酸二酯酶活性促进cAMP发酵合成的工艺方法。方法: 在7 L发酵罐上进行添加氨茶碱的发酵实验,通过对发酵主要参数、关键酶活性、能量代谢水平等进行分析,针对性提出了氨茶碱与柠檬酸盐协同作用促进cAMP合成的发酵工艺。结果: 与对照相比,添加5 mg/L氨茶碱批次的cAMP产量提高25.9%,副产物腺苷浓度减少41.6%,两批次中腺苷酸环化酶和琥珀腺苷酸脱氢酶活性无显著改变,而磷酸二酯酶和5'-核苷酸酶活性明显下降。能量代谢分析结果表明,两批次的胞内ATP/AMP相比于对照批次明显降低,而AMP水平却显著上升,ATP合成水平成为限制产物积累的主要因素。氨茶碱与柠檬酸盐协同添加的cAMP发酵工艺中,cAMP产量达到4.48 g/L,比单独添加柠檬酸钠和氨茶碱分别提高22.1%和13.8%,副产物腺苷浓度仅为0.98 g/L,分别降低51.7%和25.3%。结论: 氨茶碱抑制了磷酸二酯酶和5'-核苷酸酶活性,减少cAMP分解和副产物合成,显著提高cAMP产量,然而ATP合成水平成为产物积累的限制因素。氨茶碱与柠檬酸盐协同添加工艺将抑制磷酸二酯酶活性和提高能量代谢水平相结合,进一步促进了产物发酵合成。     

气相色谱质谱联用技术对栝楼籽油亚麻酸和亚油酸含量的分析

通过皂化法和尿素包合法对热榨、冷榨栝楼（Trichosanthes kirilowii）籽油进行提取,采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术检测分析栝楼籽油中亚麻酸、亚油酸成分、含量。结果表明,热榨栝楼籽油中亚麻酸相对含量为4.16%～11.58%,亚油酸相对含量为68.62%～95.84%。冷榨栝楼籽油中不含亚麻酸成分。此方法适用于栝楼籽油的成分分析。     

超声波处理对淫羊藿苷生物转化的影响

利用超声波技术分别对淫羊藿苷粗品及淫羊藿苷转化发酵液进行处理,探讨超声波处理对淫羊藿苷生物转化效果的影响。经过超声波处理的实验组与未经超声波处理的对照组相比,转化效果显著提高;高效液相色谱图显示经超声波处理后淫羊藿苷峰几乎消失,苷元峰突出,超声波处理对淫羊藿苷生物转化效果影响很大。本研究确定超声波的最佳处理条件为频率40kHz,时间30min。     

辅助能量物质强化环磷酸腺苷发酵合成机制 *

微生物代谢过程中,环磷酸腺苷(cAMP)由ATP直接环化形成,强化ATP合成有利于产物的积累。在分批发酵24h添加3g/L-broth丙酮酸钠(辅助能量物质),cAMP浓度达到4.13g/L,比对照批次提高了24.4%,发酵性能得到明显改善。对关键酶活性及能量代谢水平的测定结果表明,由于丙酮酸钠的添加,丙酮酸激酶的活性显著下降,而6-磷酸葡萄糖脱氢酶、琥珀腺苷酸合成酶和腺苷酸环化酶等产物合成途径中酶的活性均明显提高;异柠檬酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶和呼吸链脱氢酶等酶活性,以及辅因子NADH/NAD ⁺、ATP/AMP均明显提高。表明添加丙酮酸钠改变了糖酵解和磷酸戊糖途径间的碳流分配,使更多碳流向产物合成途径,同时提高了整体能量代谢水平,更利于ATP的生成,为产物的合成提供了物质和能量基础,进而促进了cAMP的合成与积累。     

中国菟丝子离体再生体系的建立

选取萌发3～5d、长度3～5cm的中国菟丝子（Cuscuta Chinensis Lam）幼苗,将其分为上、中、下3部分并作为外植体进行离体培养与植株再生研究。结果表明,其上、中部片段更适宜愈伤组织诱导;诱导培养基以添加1mg L^-1 NAA和1mg L^-1 BA的MMS培养基效果最好,此培养基也可用于愈伤组织的继代培养,愈伤组织在上述培养基中已生长一年之久。分化培养基为添加1mg L^-1 BA的MMS培养基,平均每块愈伤组织可以产生2．8株植株。