敲低心肌连接斑株蛋白对人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力的影响及机制研究

该文研究了敲低心肌连接斑株蛋白(junction plakoglobin,JUP)对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭的影响及其机制。通过sh RNA慢病毒介导的方式构建了敲低JUP基因的慢病毒载体序列及其阴性对照病毒,并感染至人胃癌SGC-7901细胞中,荧光检测细胞感染效率,获得JUP基因稳定沉默及其对照细胞株。用嘌呤霉素筛选阳性转染细胞株,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和蛋白质免疫印记法(Western blot)检测JUP表达水平。采用细胞划痕愈合实验和Transwell小室实验检测敲低JUP基因之后对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响。采用Western blot检测敲低JUP之后β-连环蛋白水平的影响。结果显示,通过sh RNA介导的慢病毒成功构建了敲低JUP基因的人胃癌SGC-7901稳定细胞株。与对照组相比,敲低JUP表达可促进细胞的迁移和侵袭能力(P0.05),上调了β-连环蛋白的水平(P0.05)。以上结果表明,敲低人胃癌SGC-7901细胞中JUP基因表达后可促进胃癌细胞SGC-7901的迁移和侵袭能力可能与其上调β-连环蛋白的水平从而活化Wnt信号通路有关。     

敲低Drosha基因可抑制人胃癌HGC-27细胞的迁移和侵袭

为了探讨抑制人胃癌细胞核糖核酸酶Ⅲ家族成员Drosha蛋白的表达对胃癌HGC-27细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其与转染效率浓度梯度依赖的关系,本研究通过质粒构建的方法,采用Crispr-Cas9基因编辑网站设计针对敲除人Drosha基因的单guide RNA (gRNA)序列;利用转染试剂Lipo2000浓度梯度(2μL, 3μL, 5μL)依赖的方式将单g RNA质粒及阴性对照转染入胃癌HGC-27细胞中;利用实时荧光定量PCR (qPCR)检测阴性对照细胞和以Lipo2000浓度梯度依赖的g RNA细胞的Drosha基因表达情况;利用蛋白质免疫印记Western blotting检测不同浓度处理组Drosha蛋白的表达情况;采用CCK8法检测阴性对照细胞和以Lipo2000浓度梯度依赖的g RNA细胞的增殖能力;采用Wound healing实验比较阴性对照细胞和以Lipo2000浓度梯度依赖的g RNA细胞的迁移能力;利用Transwell TM实验比较阴性对照细胞和以Lipo2000浓度梯度依赖的g RNA细胞的侵袭能力。成功设计针对敲除人Drosha基因的单Guide RNA (gRNA)序列;与对照组相比,实验组成功抑制了人胃癌HGC-27细胞Drosha的基因及蛋白表达,增殖能力无明显改变(p0.05),但是抑制了人胃癌细胞HGC-27的迁移和侵袭能力(p0.05),其中当Lipo2000浓度为3μL时,转染效率最高,迁移和侵袭抑制率也最明显。表明了抑制Drosha基因在人胃癌HGC-27细胞中的表达量,可以以Drosha表达量依赖的方式抑制细胞的迁移和侵袭。本研究有助于为胃癌的早期诊断和与治疗提供新的分子靶标。     

癌相关成纤维细胞miR-200c对乳腺癌细胞侵袭的影响

探讨miR-200c在癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)活化中的作用,研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭能力的影响。通过质粒构建的方法分别获得miR-200c稳定干扰的NF(normal fibroblast)及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;采用Western blotting法检测miR-200c对CAF活化标志物α-SMA和FAP表达的影响;采用细胞划痕愈合实验检测miR-200c对CAF迁移能力的影响;采用胶收缩实验和侵袭实验分别检测miR-200c对CAF细胞外基质和对癌细胞侵袭能力的影响。成功构建了miR-200c稳定干扰的NF及其对照细胞株、miR-200c稳定过表达的CAF及其对照细胞株;与低表达miR-200c的细胞株相比,高表达miR-200c细胞株的α-SMA和FAP表达水平及迁移能力明显降低,其胶收缩能力和癌细胞的侵袭能力也明显减弱。miR-200c能够明显抑制CAF细胞的活化并通过细胞外基质重塑(extracellular matrix remodeling,ECM)的方式抑制癌细胞的侵袭。     

大田期烟草根系构型参数的动态变化

采用“根箱”法研究了大田期烟草根系构型参数在时间、空间上的动态变化.结果表明, 烟草2级侧根总长度的增加明显大于1级侧根,根快速增长期分别出现在移栽后26～40和56～70 d.栽后57 d(打顶)前,烟草根系的分枝密度表现为10～20＞0～10＞20～30＞30～40 cm,此后随土层的加深呈递减趋势.在主根上,以7～21 cm范围内的分枝密度最大.打顶前,比根长随着入土深度的加深而递增;栽后90 d,比根长随土层的加深而递减.1级侧根根长密度在0～10 cm土层内的变化呈“S”型曲线,10～20、20～30和30～40 cm内表现为双峰曲线;2级侧根根长密度随生育期的进程而增加,其中0～10 cm根长密度的变化为“S”曲线,其它层次为单峰曲线.