鸡κ干扰素在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及其抗病毒活性检测

干扰素（interferon,IFN）是宿主先天免疫系统的重要组成部分,它是抵抗病原体的第一道防御。为了利用家蚕杆状病毒表达系统表达鸡κ干扰素,根据已报道的序列对鸡κ干扰素的基因序列进行家蚕密码子优化,并利用共转染技术成功构建了表达用重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染家蚕,成功获得了大量鸡κ干扰素的表达产物,并通过Western blot技术对产物进行了检测鉴定。用细胞病变抑制法对干扰素κ抑制VSV-GFP感染鸡成纤维细胞（CEF）的效果进行检测,结果显示鸡干扰素κ的抗病毒效价可以达到(1.04±0.23)×107 IU·mL-1以上。高效价鸡κ干扰素的成功表达为其在抗家禽疫病等方面提供了重要的试验数据。     

铁蛋白与口蹄疫病毒VP1在大肠杆菌中融合表达及纳米颗粒自组装

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的世界上最重要的畜牧疾病之一,严重影响世界畜牧业的发展,而疫苗免疫仍然是对疫情预防和控制的最有效手段。铁蛋白具有自组装和生物修饰的特性,在纳米疫苗等领域具有广阔的应用前景。选用O型口蹄疫病毒的vp1基因和幽门螺杆菌铁蛋白基因,通过融合PCR将vp1基因构建到铁蛋白亚基基因前端,在大肠杆菌中表达后通过His标签进行镍柱亲和层析纯化。将纯化好的重组蛋白进行Western blotting检测、质谱分析和透射电镜观察,发现重组蛋白VP1-Ferritin在大肠杆菌中获得表达,并可自组装成纳米颗粒。     

小反刍兽疫病毒H蛋白的原核表达及免疫原性测定

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒（peste des petits ruminants virus,PPRV）引起的急性、接触性传染病,对我国的畜牧业发展造成了严重的影响,目前主要通过疫苗进行防控。为检测PPRV主要抗原蛋白血凝素（hemagglutinin,H）蛋白的免疫原性,从GenBank数据库中查找了近年来公布的H蛋白氨基酸序列,选择1条符合我国流行趋势的序列,对其基因序列进行优化合成后克隆至pET28a载体上。筛选出表达量高的Rosetta（DE3）菌株进行表达,表达产物经SDS?PAGE、Western Blot及质谱分析鉴定。经镍柱亲和层析纯化出单一H蛋白,取20 μg与佐剂混合后免疫小鼠,收集血清进行抗体效价检测,结果显示,血清中H蛋白抗体滴度在二免2周时达到1∶6 400,表明H蛋白具有较好的免疫原性。进一步对二免2周时血清进行中和抗体检测显示,小鼠血清对PPRV疫苗株具有中和效应,中和效价不超过1∶40。研究结果对H蛋白用于PPRV疫苗的研发提供了理论依据。