可磷酸化短肽偶联壳聚糖促进CS/DNA转染效率

合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的短肽(pSP),其中含有两个可被JaK2蛋白激酶磷酸化的酪氨酸残基.将此短肽与壳聚糖(CS)相偶联,体外磷酸化及DNA释放实验检测哺乳动物细胞裂解液对短肽的磷酸化及pSP-CS/DNA复合物中DNA释放的影响.放射性标记DNA转移实验验证pSP-CS/DNA复合物的入胞能力后,将荷荧光素酶或GFP报告基因的质粒与pSP-CS制成pSP-CS/DNA复合物,转染体外培养的C2C12小鼠成肌细胞,观察GFP的分布及细胞裂解液中的荧光素酶活性以表征转染效率.继而进行多种细胞系的转染,衡量pSP偶联的壳聚糖对不同种属细胞的转染效率.结果表明,哺乳动物细胞裂解液可有效地使短肽发生磷酸化,并藉此促进DNA与壳聚糖载体的解离.以pSP修饰的壳聚糖进行转染时,细胞裂解液的荧光素酶活性可达普通壳聚糖转染的两倍,细胞中GFP的含量也明显增加.据此推论,短肽被磷酸化后产生电荷属性的改变,促进DNA与壳聚糖载体的解离从而显著提高壳聚糖的转染效率.     

代谢综合征患者肥胖和脂质代谢参数的特征及其诊断价值

目的:比较代谢综合征(MetS)患者不同肥胖和脂质代谢参数的特征和其对疾病的诊断价值。方法:回顾性分析2016年1月至2018年12月在我院就诊的MetS患者和健康体检者,比较其体重指数(Body Mass Index, BMI)、腰高比(Waist-to-Height Ratio,WHt R)、甘油三酯/高密度脂蛋白胆固醇(TG/HDL-C)、脂肪蓄积指数(Lipid accumulation product, LAP)和内脏脂肪指数(Visceral adiposity index,VAI)的差异及不同代谢因素分组患者上述参数差异。采用ROC曲线评价不同肥胖和脂质代谢参数对MetS的诊断价值。结果:与健康组相比,MetS组无论男性还是女性患者BMI、WC、WHt R、血压、FPG、TG、TG/HDL-C、LAP和VAI均明显升高,而HDL-C显著降低(P0.05)。随着MetS特征个数的增加,MetS组患者的BMI、WHt R、TG/HDL-C、LAP和VAI均呈现显著增加趋势(P0.05)。上述五个诊断MetS的ROC曲线中都是LAP的AUC最大,男性AUC为0.896,敏感度为0.75,特异度为0.84。女性LAP的AUC为0.874,最佳诊断切点为31.05,此时的敏感度为0.74,特异度为0.92。结论:LAP对代谢综合征的诊断效能最高,男性LAP大于26.36、女性LAP大于31.05有助于诊断代谢综合征患者。     

星虫胶原蛋白的生物学特性研究

本文研究了胶原蛋白的生物学特性.结果显示,胶原蛋白溶液的粘度随浓度的增大而增大,随着温度的升高而下降;酸性条件下,粘度总体呈下降趋势,碱性时粘度变化不大;外加中低浓度的电解质与非电解质对胶原蛋白溶液粘度的影响不显著,溶液的流变学特性相对稳定.星虫胶原蛋白对小鼠皮肤无致敏反应,对创面愈合有明显的促进作用,该胶原蛋白不仅可以应用于食品与化妆品行业,还可以进一步应用于生物医学材料等领域.     

pSP偶联低分子量壳聚糖介导siRNA对靶基因的沉默

放射性标记针对荧光素酶报告基因（Luc）的siRNA,与不同分子量的壳聚糖（CS）制备成CS/siRNA复合物,转染可稳定表达Luc基因的MDA-MB-231/Luc人乳腺癌细胞系.与 较大分子量壳聚糖相比,低分子量壳聚糖（LMWC）与siRNA形成的复合物具有更小的粒径及更强的siRNA转染能力,但是对靶基因的沉默效应却不高. 其原因归咎于低分子量壳聚糖（Mr为2 000或5 000,LMWC）与siRNA间强烈的电荷引力限制了siRNA在细胞内的释放.合成基序为LLLRRRDNEY*FY*VRRLL的可磷酸化短肽(pSP)与LMWC相偶联,合成pSP-LMWC.分别对siRNA及pSP-LMWC进行FAM及Dabcyl标记,利用FRET技术检测细胞内pSP-LMWC与siRNA的解离.结果表明,pSP修饰可大幅度增加siRNA与LMWC在细胞内的解离,成为有功能的游离形式,从而显著下调靶基因的表达.本文的结果表明,低分子量壳聚糖具有良好的siRNA递送能力,促进其与siRNA在细胞内的解离可有效提高siRNA对靶基因的沉默效应.