光遗传技术通过Wnt/β-Catenin通路对新生神经元的影响*

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路光遗传技术在促进新生神经元成熟中的作用。方法:从胎鼠大脑皮层中提取神经干细胞,用携带DCX-ChR2-EGFP基因的慢病毒感染神经干细胞,观察神经干细胞分化为新生神经元后DCX的表达。实验细胞分为3组(n=9):对照组、NSCs+EGFP和NSCs+ChR2组。其中对照组为正常培养的NSCs(NSCs组);NSCs+EGFP组为携带DCX-EGFP基因慢病毒感染神经干细胞组;NSCs+ChR2组为携带DCX-ChR2-EGFP基因慢病毒感染神经干细胞组。病毒感染后48 h后连续3 d行470 nm蓝激光照射,然后检测各组NeuN⁺阳性细胞(成熟神经元标志物)的密度和NeuN⁺/Hoechst比值情况;Western blot检测各组成熟神经元相关蛋白MAP2、NeuN、Neurog2、NeuroD1和GluR2蛋白表达水平和Wnt/β-catenin通道相关蛋白TCF4和β-catenin蛋白的表达水平。用L-型钙通道阻断剂100 μmol/L维拉帕米或50 μg/ml的β-catenin抑制剂Dkk1处理NSCs+ChR2组细胞,然后行Western blot检测各组MAP2、NeuN、Neurog2、NeuroD1和GluR2蛋白表达水平。结果:连续3 d 470 nm蓝激光照射后,NSCs+ChR2组中NeuN⁺阳性细胞密度(成熟细胞)和NeuN⁺/Hoechst明显高于NSCs组和NSCs+EGFP组(P均＜0.05);Western blot检测的MAP2、NeuN、Neurog2、NeuroD1、GluR2蛋白及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、TCF4表达水平均明显高于NSCs组和NSCs+EGFP组(P均＜0.01);L-型钙通道阻断剂维拉帕米或β-catenin抑制剂Dkk1处理NSCs+ChR2组细胞后MAP2、Neurog2、NeuroD1和GluR2蛋白表达水平明显下降(P均＜ 0.01),NeuN表达水平也下降(P＜0.05)。证明ChR2通道蛋白开放产生阳离子内流促进新生神经元成熟,是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。结论:光遗传学方法通过Wnt/β-catenin信号通路促进新生神经元成熟。     

培养基中能量底物对猪胚胎发育的影响

旨在探讨丙酮酸和乳酸对猪(Susscrofa)胚胎早期发育的影响,将NCSU-23培养基中的5.56mmol/L葡萄糖替换为0.2mmol/L丙酮酸、5.7mmol/L乳酸,并将此培养基命名为mNCSU-23。根据实验设计,孤雌胚及核移植胚转移到mNCSU-23或NCSU-23中培养。激活第2天统计孤雌胚及核移植胚中的5～8细胞胚胎数。激活第6天统计孤雌胚及核移植胚囊胚形成率及囊胚细胞数。实验结果表明,mNCSU/NCSU处理组的5～8细胞胚胎数及囊胚数显著高于对照组(P0.05);单纯使用mNCSU培养猪胚胎时,囊胚率最低,发育结果最差(P0.05)。本研究证实,在体外培养前两天,用乳酸和丙酮酸代替培养基中的葡萄糖对胚胎发育有利。     

影响亚麻花药培养的某些因素

影响亚麻花药培养的某些因素孙洪涛,付卫东,吴昌斌,徐艳芹,宋淑敏,苑志辉（黑龙江省亚麻原料工业研究所,双城１５０１１１）ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＳＯＭＥＦＡＣＴＯＲＳＯＮＴＨＥＰＯＬＬＥＮＣＵＬＴＵＲＥＯＦＦＬＡＸＳｕｎＨｏｎｇ－ｔａｏ;ＦｕＷｅｉ－ｄｏｎ...     

葛根素对肺心病大鼠血液流变学和肺动脉压的影响

目的:观察葛根素对肺心病大鼠血液流变学和肺动脉压的影响。方法:40只SD大鼠随机分为4组(n=10):对照组,模型组,葛根素低剂量(300 mg/kg ip)和高剂量组(600 mg/kg ip),参考薛氏常压低氧方法建立肺心病大鼠模型,常压低氧4周后测定大鼠血浆粘度,全血粘度,红细胞容积,纤维蛋白原和红细胞聚集指数等血液流变学指标和平均肺动脉压。结果:葛根素能显著降低肺心病大鼠血浆粘度,全血粘度,红细胞容积,纤维蛋白原(P<0.05),对红细胞聚集指数无显著性作用(P>0.05),显著降低模型组降低肺动脉压(P<0.05)。结论:葛根素对肺心病大鼠有治疗效果,为临床治疗肺心病提供实验依据。     

亚麻原生质体培养及植株再生

试验分别采用四个纤维用亚麻(Linumusitatissimum)品种7309,948,Belinka和Viking的无菌苗的茎尖为材料游离原生质体。以萌发10天的无菌苗茎尖游离获得的原生质体得率和活性最高,分别达到1．8×106／gFW和85．5％。以V-KM为培养基,采用琼脂岛法培养的原生质体,可在培养3天后发生第一次分裂,10天后统计细胞分裂频率为36％,20天后统计植板率达到5．2％。品种7309和Belinka再生的愈伤组织接种在均附加o．6mg/L6-BA和0．1mg／LNAA的B5-1和MS3固体培养基上,都有芽苗分化,并分别获得再生植株。品种Viking和948分别仅分化获得了不定根或叶状体。     

SYSHHJ1菌株的驯化以及降解环己烷的研究

通过研究协同驯化培养条件,确定了醇酮混合液在培养基中加入量为0．6mL／L（培养基）,并得到1株以环己烷为惟一碳源和能源的降解菌株SYSHHJ1。之后研究了培养时间、环己烷浓度、pH、含盐量和温度等单因素对SYSHHJ1菌株生长的影响,在此基础上设计正交实验并进行了优化,确定了SYSHHJ1菌株最适培养条件：培养时间84—108h、环己烷浓度480mg／L、pH6、含盐量10g／L、温度30℃。通过液相色谱法分析代谢产物,也证明了该菌株可以利用环己烷。     

生物法降解低浓度含环己烷废气的研究

使用以环己烷为惟一碳源和能源的降解菌株SYSHHJ1,设计了生物滤池装置,控制出口环己烷浓度不大于120 mg/m3,在温度为25~30℃时,研究了相对湿度、入口环己烷浓度、气体流量等操作条件对环己烷去除效果的影响,得到了最佳条件:相对湿度为85%,入口环己烷浓度为600 mg/m3,气体流量为0.04 m3/h环己烷最高去除率为82.0%,表明此菌株降解低浓度环己烷废气有较好的效果。     

Exendin-4对成年小鼠脑室下区神经干细胞分化作用的体外研究*

目的:研究艾塞那肽(Ex-4)对成年小鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)分化的影响及机制。方法:提取5周龄C57BL/6J小鼠SVZ的NSCs,100 nmol/L Ex-4处理分化14 d观察细胞形态,用免疫荧光检测巢蛋白(nestin)和胰高糖素样肽-1受体(GLP-1R)的表达。用shRNA敲低GLP-1R,将研究分为四组:对照组,Ex-4组,GLP-1R敲低组,GLP-1R敲低+Ex-4组。100 nmol/L Ex-4处理14 d后免疫荧光标记β-微管蛋白3(β-tublin III)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)并统计β-tublin III阳性细胞比例,Western blot检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)的活化。为进一步研究Ex-4对MAPK和PI3K通路的影响,分别以丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂U0126 0.07 μmol/L预处理细胞30 min、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)抑制剂LY294002 50 μmol/预处理细胞2 h,将研究分为: 对照组,Ex-4组,U0126组,U0126+Ex-4组,LY294002组,LY294002+Ex-4组,Western blot检测各组CREB的活化,各组实验独立重复三次。结果:成功从C57BL/6J小鼠SVZ提取NSCs,免疫荧光提示NSCs中nestin以及GLP-1R阳性。相对于对照组,Ex-4组分化为神经元的比例更高。GLP-1R敲低+Ex-4组中神经元比例与对照组基本一致(P＜0.01),β-tublin III阳性的细胞显示出GLP-1R以及CREB活化阳性。Western blot显示Ex-4组中CREB显著活化,GLP-1R敲低+Ex-4组的CERB活化与对照组基本一致(P＜0.01)。U0126+Ex-4组与Ex-4组CERB活化水平一致,LY294002+Ex-4组与对照组CERB活化水平一致(P＜0.01)。 结论:Ex-4通过GLP-1R受体促进成年小鼠SVZ中NSCs分化为神经元,这一作用可能通过PI3K/ CREB通路来实现。