蟾蜍泛素羧基末端水解酶（tUCH）以不依赖其UCH活性的方式参与卵母细胞成熟调控

本实验室巳报道中华大蟾蜍卵母细胞的p28蛋白具泛素羧基末端水解酶活性,称作tUCH,它和哺乳类中发现的UCH Ll的氨基酸序列具高度同源性,二级结构同源性比较发现,二者可能具类似的功能。本文实验表明：未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的可溶性蛋白中均含有tUCH,约占提取物中蛋白质总量的2％。根据测定所得到的GST—tUCH和GST—UCH Ll对底物Ub—AMC的酶动力学参数,说明卵母细胞中tUCH可能与小鼠UCH L1有类似的生物学功能;anti—tUCH单抗可以与原核细胞表达的tUCH和显性失活突变类型tUCH C(90)S特异结合,但不识别小鼠的UCH Ll。Anti-tUCH单抗能够和tUCH结合但不能封闭它的UCH活性;当anti-tUCH单抗注入卵母细胞内,则孕酮诱导的生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)过程受到抑制,足见tUCH参与GVBD调节并不依赖其UCH活性。     

（cAMP,ATP）区域化与基因转录调控模型

（ｃＡＭＰ,ＡＴＰ）区域化与基因转录调控模型孙兆贵（山东中医学院肿瘤技术省重点实验室４２信箱,济南２５００１４）李震（山东中医学院生化教研室）关于基因差异性表达机制的模型,以及有关研究报道很多,艾伯茨等（１９９０）［２］,麦克莱恩等（１９８７）［５］...     

UCHL1基因缺失突变A549肿瘤细胞单克隆株的建立与特性分析

本研究旨在探索泛素羧基末端水解酶L1(ubiquitin C-terminal hydrolase-L1,UCHL1)对非小细胞肺癌细胞系A549细胞的作用。用CRISPR-CAS9基因编辑技术构建UCHL1基因敲除的A549细胞株,用RT-PCR和Western blot检测A549细胞中UCHL1基因敲除情况,用CCK-8检测细胞增殖能力的变化,用流式细胞仪检测细胞周期的变化,用CCK-8检测A549细胞对顺铂药物敏感性的改变,用划痕与Transwell实验检测A549细胞迁移能力的变化,用Western blot检测与A549细胞迁移有关的蛋白表达变化。结果显示,使用CRISPR-CAS9技术构建的基因移码突变导致A549细胞株UCHL1 mRNA和蛋白缺失,UCHL1基因功能缺失后A549细胞增殖和各细胞周期比例没有明显变化,但对顺铂的药物敏感性降低,迁移能力下降,Erk1/2蛋白磷酸化水平升高。以上结果提示,UCHL1基因功能缺失可导致A549细胞顺铂耐药性提高,细胞迁移能力降低,其机制可能涉及Erk1/2信号通路的激活。     

泛素羧基末端水解酶-1(UCHL1)的分子进化分析

泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin C-terminal hydrolase L1,UCHL1)是一种去泛素化酶,特异性表达于脑与生殖腺,具有去泛素化活性、稳定细胞内泛素单体的功能。为确定UCHL1在脊椎动物中是否普遍存在,从而选择身体构造更简单的模式动物研究其生物学功能,通过生物信息学手段分析脊椎动物门的11种生物中基因UCHL1的分子进化情况,分析显示UCHL1基因组长度在进化过程中变化较大,但外显子个数变化较小,蛋白氨基酸残基数目也基本维持在223 aa左右。分析结果表明,mRNA有不同的剪接方式,但氨基酸序列在进化上是高度保守的,UCHL1蛋白活性位点同源性高达90%,该结果证明了蛋白UCHL1的功能对于物种正常生存是必须的。     

蟾蜍泛素羧基末端水解酶(tUCH)以不依赖其UCH活性的方式参与卵母细胞成熟调控

本实验室已报道中华大蟾蜍卵母细胞的p28蛋白具泛素羧基末端水解酶活性,称作tUCH,它和哺乳类中发现的UCH L1的氨基酸序列具高度同源性,二级结构同源性比较发现,二者可能具类似的功能。本文实验表明:未成熟卵母细胞和成熟卵母细胞的可溶性蛋白中均含有tUCH,约占提取物中蛋白质总量的2%。根据测定所得到的GST-tUCH和GST-UCH L1对底物Ub-AMC的酶动力学参数,说明卵母细胞中tUCH可能与小鼠UCH L1有类似的生物学功能;anti-tUCH单抗可以与原核细胞表达的tUCH和显性失活突变类型tUCH C(90)S特异结合,但不识别小鼠的UCH L1。Anti-tUCH单抗能够和tUCH结合但不能封闭它的UCH活性。当anti-tUCH单抗注入卵母细胞内,则孕酮诱导的生发泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)过程受到抑制,足见tUCH参与GVHD调节并不依赖其UCH活性。