毛竹APX家族基因鉴定和表达分析

为了解毛竹(Phyllostachys edulis)抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase, APX)基因家族成员在不同组织和非生物胁迫下的表达模式,利用生物信息学方法从毛竹基因组数据库中鉴定得到7条APX同工酶基因(PeAPXs),根据亚细胞定位预测结果可分为3个亚类。各个基因启动子序列中存在低温、干旱以及光响应元件。毛竹PeAPXs在7个组织中的表达丰度不同,具有组织特异性。qRT-PCR结果表明,在干旱、盐和低温胁迫下各基因的表达模式存在着较大差异,其中PeAPX2在3种胁迫下均维持着较高的表达水平;低温胁迫对PeAPXs有诱导作用,其表达量均呈上调趋势;干旱胁迫下,PeAPX1的表达量下调,未检测到PeAPX3、PeAPX6、PeAPX7表达;盐胁迫下,除PeAPX3和PeAPX6外,其余基因表达量上调。因此,毛竹APX基因可能参与到不同的非生物胁迫过程并在毛竹的生长发育阶段发挥着重要的作用。     

法尼醇X受体激动剂细胞筛选体系的建立与优化

本研究旨在建立一种基于双荧光素酶报告基因检测体系的法尼醇X受体(farnesoid X receptor, FXR)激动剂细胞筛选体系,以满足对FXR激动剂先导化合物的高通量筛选。通过在报告基因质粒pGL4-luc2P-Hygro中的萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Luc)基因上游克隆并插入来自FXR靶基因的FXR反应元件(FXR response element,FXRE)片段,构建用于筛选FXR激动剂的报告基因质粒,并结合海肾荧光素酶内参质粒,建立能够有效反映药物对FXR激动效应的双荧光素酶报告基因细胞检测体系。通过一系列优化实验,比较了过表达RXR、鼠源和人源FXR、不同的FXRE片段、FXR过表达质粒与报告基因质粒的混合比对筛选体系诱导效率和灵敏度的影响。根据上述结果,最终确定了优化条件,优化后体系Z因子达到0.83。本研究建立了一种用于FXR激动剂筛选的改良的基于双荧光素酶报告基因检测体系的细胞筛选体系,其主要特征在于,使用多段FXR靶基因上的FXRE片段叠加组成一种新型的增强型FXRE元件,而非传统的反向重复序列-1 (inverted repeats...     

大分子量重组蛋白在丝状噬菌体表面的展示表达及其与小分子相互作用的初步研究

利用pHEN1KM13噬菌粒系统表达融合蛋白,进而确定大分子量重组蛋白在丝状噬菌体表达的部位及其表达后的生物活性。通过蛋白酶切处理前后噬菌体侵染细菌能力的变化快速地检测大分子蛋白质能否在噬菌体表面展示表达;比较了谷胱甘肽S转移酶及其与三个不同长度连接臂融合的外源蛋白在噬菌体表面的表达和组装,确定了不大于40kD的重组蛋白分子能展示表达在丝状噬菌体表面;并利用已知的小分子化合物与蛋白质的相互作用证明了组装在噬菌体表面的谷胱甘肽S转移酶重组蛋白仍保持其天然的结合活性,为利用噬菌体展示系统研究蛋白质与小分子化合物的相互作用建立了基础。     

MALDI-TOF质谱技术研究铁蛋白蛋白壳表层的电荷分布

采用Sephacryl S-300排阻层析和DEAE－纤维素层析技术分离纯化Hong鱼肝铁蛋白（Liver ferritin of Dasyatis Akajei,DALF）。纯化后的DALF经梯度聚丙烯酰胺凝胶再次分离后,显示出两条凝胶事,即单分子DALF和双聚态DALF。选用基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱技术（MALDI－TOF MS）研究DALF的电荷分布时,发现DALF蛋白壳表层上显示出三种不同质荷比的分子离子峰,其质荷比为10369.41m/z、20710.33m/z和41809.43m/z。当DALF亚基被解离后,这三个分子离子峰随之消失,因而推测DALF蛋白壳表层存在着高密度正电荷区域,并与该蛋白形成非电惰性有着密切联系。通过拟出DALF蛋白壳表面电荷分布模型,进一步阐明DALF从铂电极上接受电子的机理。     

猪脾铁蛋白反应器储存有机小分子能力的研究

由透析袋、脱铁核的猪脾铁蛋白（Ｐｉｇ ｓｐｌｅｅｎ ａｐｏｆｅｒｒｉｔｉｎ,ＰＳＡＦ）、磁力搅拌系统、酸度计及水浴恒温器构建成铁蛋白反应器,并用于捕获且储存水体中微量有机小分子（中间体及有机磷农药）。实验结果表明,有机小分子（亚甲蓝及劳氏紫）络合于ＰＳＡＦ蛋白上表层的同时,又被ＰＳＡＦ捕获,并以共价化合物方式储存于蛋白宙内。此外,外加扫描电位（－１００－－３００ｖｓ．ＮＨＥ）不仅能提高ＰＡＳＦ储存     

大型热带水库-松涛水库枯水期浮游植物群落特征

松涛水库是一个大型热带水库,分为两个主要水域:番加洋和南丰洋,2003年12月对该水库的这两个水域的浮游植物进行采样,共发现7门65种藻类。松涛水库番加洋库区水体的浮游植物总细胞密度为1.08×10⁶cells·L^-1,主要种类组成为蓝藻(Cyanophyta)-绿藻(Chlorophyta)型。松涛水库南丰洋库区水体的浮游植物群落为细胞密度为1.14×10⁶cells·L^-1,主要种类组成为绿藻(Chlorophyta)-硅藻(diatom)型。松涛水库库区水体总体已为避-富营养,其中富营养型浮游植物指示种类有:铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa Kütz.),针状蓝纤维藻(Dactylococcopsis acicularis),镰形纤维藻(Ankistrodesmus falcatus),小环藻(Cyclotella menighiniana),模糊直链藻(Melosira spp.)等。与亚热带和温带的水库比较,处于热带地区的松涛水库浮游植物,在湖泊区微囊藻等适应高温高光强的种类具有更高的细胞密度。松涛水库河流区最主要的优势种是硅藻门的针杆藻。