黄原胶生产菌株XCCNAU—92的选育

从野生型甘蓝黑腐黄单胞菌中筛选出XCCNAU—01作为育种的出发菌株。用硫酸二乙酯和氯化锂复合诱变得系列突变体,经平板、摇瓶发酵必传代试验筛选出黄原胶生产菌株XCCNAU－92。对蔗糖、玉米淀粉等碳源皆有较强的利用能力,当以蔗糖为碳源时,30℃,102r／m发酵72h,产胶量达36．25g／kg,提高12．9％,粘度达17200cp,增加43．3％,碳源转化率达72．5％。     

XCCNAU—92发酵生产黄原胶的适宜条件

XCCNA－92发酵生产黄原胶的适宜条件是：好氧,发酵温度为30℃,培养基起始pH为7.0,接种量6％,发酵周期60h。利用最佳培养基配方,在30℃,150r／min条件下发酵72h,工业级黄原胶产量达40.84g／L,发酵液粘度86000cp,丙酮含量4．1％,碳源转化率达68.1％。     

枯草芽孢杆菌B2菌株产生的表面活性素变异体的纯化和鉴定

利用6mol/L HCI沉淀枯草芽孢杆菌B2菌株的去细胞培养液,甲醇抽提获得脂肽类抗生素粗提物,过Sephadex LH-20层析柱获得粗纯化物,经MALDI-TOF-MS检测表明B2菌株仅含有表面活性素一种脂肽类抗生素。利用HPLC SMART SYSTEM,将粗纯化物过μPRC C2／C18层析柱对表面活性素变异体进行分离后获得纯化物。经MALDI-TOF-PSD—MS对纯化物的结构分析表明,B2菌株的表面活性素变异体由13、14和15个碳原子的脂肪酸链以及L-Glu-L-Leu—D—Leu—L-Val-L-Asp-D—Leu-L-Leu七环肽组成。     

重组粘粒pIXUR3502对甘蓝黑腐黄单胞菌胞外多糖生物合成的负调控

通过三亲交配,XCCNAU-1基因文库中的重组粘粒可以从Ecoli转移到XCCNAU－R3中,绝大多数重组粘粒的转入对甘蓝黑腐菌胞外多糖（Eps）生物合成无明显影响,但导致菌株生长较慢。重组粘粒pIXUR3502（约50kb）对Eps生物合成有负调控,使产量降低35.1％,发酵液粘度降低40．6％,其中,载体pIJ3200本身使产量降低6．7％,发酵液粘度降低9．4％,约28kb的外源DNA片段使产量降低28．4％,发酵液粘度降低31．2％。     

XCCNAU-92生产黄原胶的工业发酵培养基成份

ＸＣＣＮＡＵ－９２生产黄原胶的工业发酵培养基成份是：蔗糖、玉米淀粉、氮源Ｘ、鱼粉、ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４、Ｋ２ＨＰＯ４。适宜的Ｃ／Ｎ是：蔗糖（玉米淀粉）／氮源Ｘ＝６０．０／１．０,蔗糖（玉米淀粉）／鱼粉＝６０．０／１０．０。ＣａＣＯ３、ＭｇＳＯ４对ＸＣＣＮＡＵ－９２合成黄原胶有明显促进作用,Ｋ２ＨＰＯ４在发酵过程中使ｐＨ保持稳定,Ｍｎ２＋、Ｚｎ２＋、Ｆｅ３＋、柠檬酸和谷氨酸对生产黄原胶无促进作用。     

枯草芽孢杆菌B2菌株产生的表面活性素变异体的纯化和鉴定

利用6 mol/L HCl沉淀枯草芽孢杆菌B2菌株的去细胞培养液,甲醇抽提获得脂肽类抗生素粗提物,过Sephadex LH20层析柱获得粗纯化物,经MALDITOFMS检测表明B2菌株仅含有表面活性素一种脂肽类抗生素。利用HPLC SMART SYSTEM,将粗纯化物过μRPC C2/C18层析柱对表面活性素变异体进行分离后获得纯化物。经MALDITOFPSDMS对纯化物的结构分析表明,B2菌株的表面活性素变异体由13、14和15个碳原子的脂肪酸链以及L-Glu-L-Leu-D-Leu-L-Val-L-Asp-D-Leu-L-Leu七环肽组成。