乳鼠坐骨神经植块法的雪旺氏细胞培养

目的:改善并建立一种新的大鼠雪旺氏细胞(SCs)的培养方法,为研究外周神经损伤修复模型及其它外周神经相关实验提供高纯度、多数量的SCs。方法:麻醉后显微镜下解剖并分离新生3天内SD大鼠的坐骨神经,采取植块培养的方法,显微镜下尽量剥除坐骨神经纤维外膜,并梳理松解坐骨神经的神经纤维束。梳理后剪碎坐骨神经,每小块种植于培养皿中,使用纯血清培养4小时,再加入正常的DMEM/F12培养基,消化培养2-3代。最后用S-100及GFAP免疫荧光染色进行纯度鉴定。结果:本实验在总结前人实验的基础上,联合创新采用坐骨神经外膜剥除、神经内膜梳理、纯血清培养以及胰酶差速消化等方法,短时间内获得SCs的纯度可达99%以上,可用于进一步对雪旺氏细胞的功能进行研究。结论:这种选用乳鼠坐骨神经植块、血清培养的方法简单易操作,无需额外的生长因子及抑制因子,可在短期内获得大量高纯度的SCs。