离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型的建立及评价

目的：建立离体大鼠主动脉内皮细胞氧化应激损伤模型,为细胞损伤及细胞凋亡的调控研究提供基础。方法：大鼠断头处死在无菌条件下开胸取主动脉,经组织块培养法后传代培养得到充足主动脉内皮细胞,接种于96孔板或爬片培养,每组设6个复孔,用于之后的各项试验检测。以不加H₂O₂的组作为对照组,以不同浓度的H₂O₂（100、200、300、400、500 μmol/L）作用于内皮细胞相同时间12 h,来筛选最佳作用浓度;依据结果以相同浓度的H₂O₂（100和200 μmol/L）分别作用不同时间（3、6、9、12及24 h）,来筛选最佳作用时间。通过免疫荧光法鉴定、细胞存活率检测、生化指标（LDH-L、NO、MDA、SOD）检测及内皮细胞凋亡指数等变化,评价及验证模型的建立。结果：对细胞内Ⅷ型胶原抗原进行免疫荧光染色后鉴定血管内皮细胞培养成功;在12 h的相同作用时间下,随着H₂O₂浓度的加大,细胞存活率呈显著下降（77.63%±5.20%~40.90%±2.10%）;相同浓度（100 μmol/L组和200 μmol/L组）随着作用时间的增加,细胞存活率呈显著递减（100 μmol/L组为86.83%±12.11%~44.26%±5.70%,200 μmol/L组为78.28%±11.98%~34.45%±5.87%）;以H₂O₂浓度为100 μmol/L作用3、6、9、12及24 h,培养液中生化指标在9 h后LDH-L与MDA呈显著递增,NO与SOD呈显著递减;在H₂O₂浓度为100 μmol/L与作用时间12 h的条件下,流式检测结果显示内皮细胞凋亡率为16.92%±2.37%,显著高于对照组2.68%±0.47%（P<0.01）; TUNEL检测内皮细胞凋亡指数为17.65%±2.36%,显著高于对照组的3.23%±0.57%（P<0.01）。结论：该方法成功建立了体外血管内皮细胞氧化应激损伤模型,探索了轻重适度的诱导细胞损伤和细胞凋亡的造模方法,可以成为开展多种血管内皮细胞损伤及凋亡调控机制研究的基础。     

四川九寨沟水生生物初步调查

一、自然概况九寨沟位于东经103°54′,北纬33°12′,属青藏高原的四川盆地边缘地带,地处南坪县城西郊45公里处,总面积约620平方公里。九寨沟呈“人”形,主沟称树正沟,两条支沟一称日则沟,一称则查洼沟,沟道总长度约80公里,沟内有串珠状的大小湖泊(俗称海子)约200多处。水源来自地下泉水和融雪,出沟后汇入白河再注入嘉陵江。九寨沟地区以石灰岩为主。谷底到高山之巅,海拔2050——4600米,相对高差2000——2500米。谷坡险峻,由于地震和风化作用,常形成崩崖、滑坡等,堆积物堵塞于沟内,形成千姿百态的各类湖泊。九寨沟气候凉爽宜人,根据其中心诺…