NaIO_4氧化–深度测序技术的优化用于检测微量RNA样品中小RNA 3′末端甲基化修饰

2′-O-甲基化是存在于多种小RNA 3′末端的修饰,具有重要的生物学功能。目前高通量研究小RNA 3′末端2′-O-甲基化的方法主要是NaIO_4氧化处理结合小RNA深度测序,但该方法需要3μg总RNA,难以用于研究少量细胞中小RNA的3′末端甲基化修饰。该研究通过调整NaIO_4氧化处理的条件以及测试有无甘油终止氧化反应对小RNA文库构建的影响,优化了适用于微量RNA的氧化条件,实现对10 ng小鼠睾丸样本总RNA中的小RNA 3′末端甲基化修饰的深度测序检测,建立了用于检测微量RNA样品中小RNA 3′末端甲基化修饰的方法,为检测少量细胞中小RNA的3′末端甲基化修饰提供了有效方法。     

MicroRNA引起mRNA降解关键核酸酶CAF1和POP2的生物进化分析

MicroRNA(miRNA)参与调控高等真核生物中三分之一以上基因的表达,其中核酸酶CAF1(CCR4-associated factor 1)及其同源基因POP2在miRNA引发的mRNA 3′端多聚腺苷酸(poly(A))的脱腺苷酸化过程中起了关键作用.通过实时定量RT-PCR的方法检测了小鼠各个组织中CAF1和POP2的相对表达情况,发现CAF1和POP2的组织分布特征不同.大多数组织中CAF1的表达水平明显高于POP2,并且组织间差异很大,特别是在大脑、小脑以及睾丸组织中CAF1的表达量很高,而POP2的表达量和变化幅度都较低.蛋白质序列比对发现,CAF1和POP2是一类进化过程中高度保守的核酸外切酶,在酵母、线虫、果蝇和尾索动物代表物种海鞘中都只存在单一基因,而进化到鱼类后产生了两个同源基因——CAF1和POP2,其中CAF1的氨基酸序列保守性较POP2更高,更加接近于原始的单一序列.CAF1和POP2这一对同源基因氨基酸序列的主要差别在蛋白质的C端.鱼类中POP2的C端序列同CAF1的序列较为接近,而在爬行动物之后POP2产生了与CAF1具有明显差异的C端序列,并逐渐趋于稳定.我们的分析结果同已有的功能研究一致,表明可能在miRNA产生后的进化过程中产生了CAF1和POP2两个同源基因,其中CAF1主要担负miRNA调控mRNA脱腺苷酸化的功能,而POP2可能主要参与其它不同的调控作用。     

基因表达调控多面手——microRNA和siRNA的作用机制

miRNA(microRNA)是一类广泛存在于高等真核细胞中的长度约为21个碱基的小分子非编码RNA,参与调控三分之一以上基因的表达,并与多种人类疾病存在重要关联。而siRNA(small interfering RNA)是RNA干扰(RNA interference,RNAi)中的效应分子,其结构和作用机制与miRNA存在许多类似之处。由于miRNA和siRNA具有重要的生物学功能。因此,对它们作用机制的理解具有非常重要的理论意义和应用指导价值。该综述将对它们作用机制的研究进展做一总结和回顾。