旋覆代赭汤对食管癌细胞干性的影响*

目的: 探究旋覆代赭汤对食管癌细胞干性的影响。方法: 将BALB/c裸鼠随机分为对照组与实验组,每组5只,分别连续给予生理盐水和旋覆代赭汤(9.89 g/kg)灌胃处理,在给予灌胃第8日时皮下接种5×10⁶细胞数量的人源食管癌ECA-109细胞,每周测量肿瘤大小,4周后处死小鼠。收取肿瘤组织和小鼠血清,采用RT-qPCR、Western blot和免疫组化方法检测肿瘤细胞干性相关转录因子NANOG、OCT4、SOX2的表达。分别用含10%胎牛血清和上述两组小鼠的血清处理48 h食管癌ECA-109细胞,每组设置三个复孔,用RT-qPCR和Western blot方法检测NANOG、OCT4、SOX2的mRNA和蛋白表达水平,以及AKT及其磷酸化(p-AKT)的蛋白表达水平;用流式细胞术检测肿瘤细胞中ALDH酶活性;用成球实验检测肿瘤细胞的成球数量。结果: 与对照组相比,旋覆代赭汤显著抑制食管癌小鼠肿瘤的生长和大小(P＜0.01或P＜0.05);旋覆代赭汤药物血清显著降低食管癌细胞的中NANOG、OCT4和SOX2 mRNA和蛋白的表达水平、ALDH酶活性和成球数量,以及AKT和AKT的磷酸化(p-AKT)水平(P＜0.01或P＜0.05)。结论: 旋覆代赭汤具有抑制食管癌细胞干性的作用,其可能是治疗食管癌的潜在有效药物,为食管癌治疗探寻新的有效药物提供理论依据。     

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族基因多样性的研究(英文)

根据已获得的白纹伊蚊CYP6家族某成员cDNA序列片段AEDR ,设计基因特异性引物 ,以白纹伊蚊总RNA为模板 ,进行cDNA末端快速扩增 ,扩增产物经T -A克隆、测序。结果显示 :通过 5’ RACE获得 1个非全长cDNA序列 (GZS331 ) ,其与CYP6N1、CYP6N2的同源性分别为 59 8%和 59 1 % ,与CYP6N3v1 -v3同源性最高 ,达 83 9% - 84 3% ;通过 3’ RACE获得 6个非全长cDNA序列 ,其中来自抗性株的GZG0 33序列与CYP6N3v1 -v3的同源性达 98 2 % - 99 1 % ,而其余 3’ RACE克隆与CYP6N3v1 -v3的同源性则达 84 3% - 85 6%。上述所有非全长cDNA序列均与哺乳动物CYP3A1以及夜蛾CYP9A1有较高的同源性 ,分别为 2 3% - 36 1 %和 2 7 6% - 34 1 %。用PC/GENE软件所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。所得非全长cDNA序列上报国际P450命名委员会进行统一的命名 ,并对蚊虫中细胞色素P450基因多样性及其形成原因进行了分析     

人乳头瘤病毒(HPV)58型DNA疫苗免疫原性的初步分析

为了检测HPV 58型不同L1基因的DNA疫苗的免疫原性,以pcDNA3.1为载体分别构建含HFV 58型不同L1基因的DNA疫苗,命名为L1h、L1h△c、L1S、L1SM和L1wt.用免疫印迹法检测各DNA疫苗的体外表达情况;各重组质粒与pcDNA3.1-h58L2和pcDNA3.1-GFP共转染293FT细胞,检测其形成假病毒的能力;并将各DNA疫苗肌肉注射免疫小鼠,利用假病毒中和实验检测中和抗体水平,用ELISPOT检测细胞免疫情况.结果显示,本实验成功构建了五种DNA疫苗,L1h△c的体外表达量最高,L1S和L1SM的表达量次之,L1wt没有表达;重组质粒L1S能够形成假病毒,而其他四种重组质粒均不能形成假病毒.L1S和L1h均可在小鼠体内诱导中和抗体,但L1S诱导的中和抗体的平均滴度为1:6 400,明显高于L1h诱导的中和抗体水平(平均滴度为1:48),而其他疫苗在小鼠体内未产生中和抗体.对五种疫苗均未检测出特异性的细胞免疫反应.结果提示,体外能够组装成假病毒的DNA疫苗在免疫动物后可诱导高滴度的中和抗体,为今后DNA疫苗的筛选提供参考.     

巴氏钝绥螨rDNA的ITS基因片段序列分析

采用酚-氯仿抽提法提取了采自江西赣南的巴氏钝绥螨Amblyseiusbarkeri Hughes,1948基因组DNA。以相应引物对巴氏钝绥螨核糖体ITS基因进行PCR扩增,直接测序,得到了652bp的碱基片段（国际基因库索引号FJ392365）,其碱基序列A、C、G、T含量分别为193bp（29．60％）、114bp（17．48％）、144bp（22．09％）、201bp（30．83％）,并对其与其他植绥螨5．8SrDNA及两侧ITS序列进行了分析。     

登革病毒转基因载体pB［PUBnls_EGFP_prM］的构建及其在C6/36细胞中整合作用的检测

利用转基因技术来探索新的蚊媒疾病防治方法,将登革病毒前膜蛋白基因prM重组入以转座子piggyBac因子为基础的载体,构建了昆虫转基因载体pB［PUBnls-EGFP-prM］,在辅助质粒的作用下共同转染白纹伊蚊Aedes albopictus C6/36细胞。PCR和Southern blot证明构建的转基因载体可以将EGFP-prM基因整合入蚊虫基因组中。验证了转座子piggyBac因子、启动子polyubiquitin可以在白纹伊蚊中发挥功能,为进一步构建不传播登革病毒的转基因白纹伊蚊奠定了基础。