差示扫描量热法分析Ca2+对嗜热菌来源的α-淀粉酶热稳定性的影响

采用毛细管差示扫描量热法,分析Ca~(2+)对嗜热菌Anoxybacillus sp.来源的α-淀粉酶AGXA的热稳定性的影响及其机制。脱气后的蛋白样品和缓冲液,分别加入对应的样品池和缓冲液池中,测量温度为10℃～120℃,升温速率为1℃/min。测量结果中,纵坐标为C_p,横坐标为温度,去折叠变化曲线峰最高点对应的横坐标为蛋白质去折叠温度T_m,去折叠变化曲线与对应温度的积分值为热焓变化值ΔH,范特霍夫焓变化值ΔH_v由去折叠变化曲线峰形状决定。根据改进的吉布斯-亥姆霍兹方程计算AGXA的自由能变化值ΔG,绘制AGXA自由能变化与温度关系的稳定性曲线。结果表明:有Ca~(2+)和无Ca~(2+)存在时,AGXA的ΔH_v与ΔH的比值都约等于1.0;有Ca~(2+)时,AGXA的T_m、ΔH和ΔC_p值,分别为77.8℃、292.5 kcal/mol和2.76 kcal·mol~(-1)·℃~(-1);无Ca~(2+)时,AGXA的T_m、ΔH和ΔC_p值,则分别为67.3℃、238.3 kcal/mol和3.81 kcal·mol~(-1)·℃~(-1);有Ca~(2+)时的AGXA,其T_m、ΔH值分别比无Ca~(2+)时的高,ΔC_p值则比无Ca~(2+)时的低。有Ca~(2+)和无Ca~(2+)的α-淀粉酶AGXA的热变性过程皆为不可逆的双态模式,有Ca~(2+)的AGXA,通过增大ΔH和降低ΔC_p的方式提高其热稳定性。研究揭示了Ca~(2+)提高AGXA的热稳定性机制,为进一步扩大该酶的应用提供了理论和实践支撑。     

维生素E与左乙拉西坦对癫痫患者的临床疗效及血浆T-Aoc，MDA水平的影响

目的:探讨维生素E(VE)辅助左乙拉西坦(LEV)治疗癫痫的临床疗效及对患者血浆总抗氧化能力(T-Aoc)、丙二醛(MDA)水平的影响。方法:选取我院2013年6月~2015年9月收治的134例癫痫患者,随机分为两组。对照组予LEV治疗,观察组在此基础上给予VE治疗。记录比较两组临床疗效,治疗前后脑电图背景活动,血浆T-Aoc、MDA水平;并评价两组用药的安全性。结果:观察组总有效率为88.1%,较对照组(74.6%)明显升高(P0.05)。与治疗前相比,两组治疗后脑电图指标δ、θ波频率均明显增快(P0.05);α波频率均明显减慢(P0.05),且观察组治疗后脑电图指标改善效果均明显优于同期对照组(P0.05)。与治疗前比较,观察组血浆T-Aoc水平显著升高、MDA水平显著降低(P0.01),而对照组血浆T-Aoc水平有所上升、MDA水平略有下降,但差异无统计学意义(P0.05)。观察组不良反应发生率为10.4%,与对照组(7.5%)相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:VE辅助LEV治疗癫痫能更有效降低发作频率,改善脑电图背景活动,平衡机体氧化/抗氧化系统,且安全性高。     

利用同源重组对酵母人工染色体左右臂进行多基因修饰

构建携带哺乳动物细胞筛选基因和酵母人工染色体(YAC)同源序列的载体,利用酵母中能够发生高频率同源重组的特点对YAC分别进行左、右臂修饰,依次将NEO、EGFP及PURO基因定点整合到YAC左右臂上。用营养缺陷筛选的方法排除酵母发生突变或随机整合等情况后,用PCR及Southern杂交方法证实各筛选基因定点整合于YAC两臂上,从而获得携带3个哺乳动物细胞筛选基因的YAC克隆。并且由此建立了通过同源重组将哺乳动物标记基因定点引入YAC左右臂的多基因修饰平台。     

利用酵母人工染色体(YAC)减数分裂同源重组构建人免疫球蛋白κ链基因组大片段

具有同源重叠区的酵母人工染色体(YAC)可以利用酵母细胞减数分裂进行同源重组,从而构建更大的人工染色体基因组,这对生命科学基础研究和生物技术应用研究有着非常重要的意义。本实验以两个含人免疫球蛋白κ链基因簇片段的YAC克隆为材料,通过酵母改型、异型接合、二倍体发孢、单孢子筛选和分子生物学鉴定等技术和方法,利用酵母菌减数分裂同源重组机制,构建了一条包含人的免疫球蛋白κ轻链32个Vκ基因、5个Jκ基因、Cκ基因、Eκ基因和κde基因的YAC重组体,长度约400kb。同时,本实验利用溶壁酶消化法获取单孢子重组体,代替了传统的显微分孢操作。使得利用酵母人工染色体减数分裂同源重组的技术更加简便可行。     

环境温度和食物种类对乌龟幼仔生长和消化的影响

本文报道了不同环境温度和食物种类对一龄乌龟和二龄乌龟生长率、摄食量、消化率以及食物消化时间的影响。结果表明:随温度升高 (20℃→30℃),幼龟生长率、摄食量逐渐增加;一龄乌龟消化率随温度升高逐渐降低;但二龄乌龟的消化率在各温级间基本保持一致。食物消化时间与温度呈直线负相关。温度、食物种类和动物大小对幼龟食物脂肪消化率影响不显著。食物种类和动物大小对生长率、消化率的影响程度随温度而变,但对食物消化时间没有显著影响。     

蛋白激酶C活力的非同位素酶解测定法

在磷脂酰丝氨酸和Ca²⁺存在下,活化的蛋白激酶C以ATP为磷的供体使组蛋白H1磷酸化。用Dowex-1柱层析分离反应后的ADP与ATP,再用酸性磷酸酶水解ATP的磷酸酯键,测定磷的含量,建立了蛋白激酶C活力的非同位素酶解测定法。此法可靠易行。CV=5.2％。     

盐酸非索非那定片联合胸腺肽对慢性荨麻疹患者风团及瘙痒情况的影响

目的:研究盐酸非索非那定片联合胸腺肽对慢性荨麻疹患者风团及瘙痒情况的影响分析。方法:选择2012年7月至2013年7月在我院接受治疗的慢性荨麻疹患者108例作为研究对象。以数字法随机分成观察组(54例)和对照组(54例)。对照组患者单纯服用盐酸非索非那定片,观察组在此基础上加用胸腺肽。对比两组疗效,风团和瘙痒症状总积分情况及不良反应。结果:观察组的总有效率为72.22%(39/54),显著高于对照组的53.70%(29/54),差异有统计学意义(P0.05)。两组治疗后的症状总积分均显著下降,但观察组治疗2,4周后的症状总积分均显著小于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组的总不良反应率为9.26%(5/54),与对照组的22.22%(12/54)相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论:盐酸非索非那定与胸腺肽联合治疗慢性荨麻疹疗效较好,值得推荐。     

利用酵母人工染色体（YAC）减数分裂同源重组构建人免疫球蛋白κ链基因组大片段

具有同源重叠区的酵母人工染色体(YAC)可以利用酵母细胞减数分裂进行同源重组,从而构建更大的人工染色体基因组,这对生命科学基础研究和生物技术应用研究有着非常重要的意义。本实验以两个含人免疫球蛋白κ链基因簇片段的YAC克隆为材料,通过酵母改型、异型接合、二倍体发孢、单孢子筛选和分子生物学鉴定等技术和方法,利用酵母菌减数分裂同源重组机制,构建了一条包含人的免疫球蛋白κ轻链32个Vκ基因、5个Jκ基因、Cκ基因、Eκ基因和κde基因的YAC重组体,长度约400kb。同时,本实验利用溶壁酶消化法获取单孢子重组体,代替了传统的显微分孢操作。使得利用酵母人工染色体减数分裂同源重组的技术更加简便可行。