草原兔尾鼠卵透明带3在Pichia pastoris酵母中的分泌表达

本研究通过酵母Pichia pastoris系统表达草原兔尾鼠卵透明带3(IZP3)蛋白．获得控制害鼠生育研究的抗原物质。根据本实验室克隆获得的IZP3基因序列设计引物．并分别在5’引物和3’引物中引入了EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ酶切位点。经PCR扩增,将IZP3克隆至穿梭质粒pSuper Y上,获得的重组穿梭质粒pSuper Y—IZP3经线性化后．采用电激法将重组穿梭质粒转入酵母SMD1168菌株中．Zeocin 筛选阳性克隆,经小瓶发酵后,取上清作SDS—PAGE和Weaterm—blot检测,结果表明IZP3在酵母中得到了成功表达,表达产物的分子量约为55kD．为IZP3免疫不育控制鼠害的研究提供了检测抗原。     

马鹿线粒体DNA研究新进展

线粒体DNA作为理想的分子遗传标记被广泛应用于马鹿进化生物学、种群遗传学和保护生物学的研究.该文阐述了mtDNA在马鹿中的研究进展,重点介绍马鹿mtDNA序列的研究概况及其多态性在马鹿物种识别、起源和进化、地理分化、遗传多样性和保护管理等方面的应用情况.     

塔里木马鹿(Cervus elaphus yarkandensis)遗传结构及遗传多样性分析

目的:塔里木马鹿(Cervus elaphus yarkandensis)为马鹿的新疆特有亚种,自20世纪50年代以来,由于自然和人为因素影响,种群数量急剧下降,现已隔离成3个孤立的小种群,即沙雅种群、尉犁种群和且末种群.为了更好地保护这一濒危野生动物.方法:基于塔里木马鹿线粒体控制区部分序列对3个种群的控制区结构和遗传多样性进行了研究.结果:在34个序列比对中得到342bp的片段,含变异位点12个,占分析序列长度的3.51%,由此定义了6个单倍型.显示出3个种群总的核苷酸多样性较低(0.01351±0.00063),单倍型多样性较高(0.693±0.051);就单个种群而言,且末种群的遗传多样性最低,而沙雅种群最高.从Tajima's D和Fu and Li's D值的估算结果来看,塔里木马鹿尉犁和沙雅种群相对于中性进化的歧异度并没有明显的偏离(P>0.1),且末种群则出现了明显的偏离(分别为P<0.05和P<0.02),这预示着3个塔里木马鹿种群间可能存在一定的平衡选择.分子变异分析表明,沙雅和尉犁种群间基因流Nm大于4,说明这2个塔里木马鹿种群间存在着非常丰富的基因流,且末种群分别与沙雅、尉犁种群间基因流Nm均小于1,而且末种群分别与沙雅和尉犁种群产生了明显的遗传分化(Fst分别为0.409;0.718,P值均小于0.001),以及3个塔里木马鹿种群单倍型间的序列差异为0.012.结论:以上数据都显示了3个塔里木马鹿种群的单倍型间已经出现了明显分化.结合系统发生关系分析,应将沙雅种群和尉犁种群联合建立管理单元进行重点保护.     

大肠杆菌nhaB基因的克隆及序列分析

采用PCR扩增的方法,从大肠杆菌DH5α中克隆获得了1.5kb的Na^ /H^ 反向运输体DNA片段,经过测序和序列分析,发现该基因片段包含了nhaB基因完事的读码框架。采用DNA序列同源性分析方法,结果显示大肠杆菌DH5α nhaB基因与E.-coliK12 nhaB基因同源性高达99%,与E.coli O157:H7和Shigella flexneri的同源性均为98%,与Salmonella enterica的同源性为79%,表明nhaB基因在细菌中是普遍存在的一种Na^ /H^ 反向运输体基因。nhaB基因与大肠杆菌的耐盐性有着密切的关系,编码的功能性蛋白可能在改良生物耐盐性方面具有重要意义。     

单引物方法克隆盐角草orf25基因

采用单引物RT-PCR扩增的方法,从新疆野生植物盐角草（Salicornia europaea）中克隆获得了1.7kb的cDNA片段,经过测序和序列分析,发现基因片段包含了orf25基因完整的读码框架。采用序列同源性分析方法,结果显示新疆盐角草orf25基因与甜菜线粒体同源性高达98%,与烟草线粒体同源性达到95%,与小麦同源性为92%,与玉米同源性为88%,表明orf25基因在植物中是高度保守的一种基因,同时说明野生植物盐角草中也存在与农作物相似的雄性不育相关基因,orf25基因编码的功能性蛋白可能在影响植物雄性不育改良作物品种方面具有重要的意义。     

基因芯片筛选差异表达基因方法比较

摘要: 使用计算机模拟数据和真实的芯片数据, 对8种筛选差异表达基因的方法进行了比较分析, 旨在比较不同方法对基因芯片数据的筛选效果。模拟数据分析表明, 所使用的8种方法对均匀分布的差异表达基因有很好的识别、检出作用。算法方面, SAM和Wilcoxon秩和检验方法较好; 数据分布方面, 正态分布的识别效果较好, 卡方分布和指数分布的识别效果较差。杨树cDNA芯片分析表明, SAM、Samroc和回归模型方法相近, 而Wilcoxon秩和检验方法与它们有较大差异。     

大肠杆菌Na+/H+反向运输体A基因的克隆及序列分析

为研究细菌的耐盐机理,根据细菌中存在的Na^ ／H^ 反向运输体(nhaA)的基因序列,采用PCR扩增的方法,从大肠杆菌(Escherichia coli)DHSα中克隆获得了1．1kb的DNA片段,经过核酸序列分析,发现基因片段包含了nhaA基因完整的读码框架。采用序列同源性分析方法,结果显示nhaA基因在多种细菌中均存在,表明nhaA基因是细菌中普遍存在的一种能够反向运输Na^ 的基因,与细菌的耐盐性有着密切的关系,在转基因提高生物耐盐性方面具有主要的应用价值。     

单引物方法克隆盐角草orf25基因

采用单引物RTPCR扩增的方法,从新疆野生植物盐角草（Salicornia europaea）中克隆获得了1.7kb的cDNA片段,经过测序和序列分析,发现基因片段包含了orf25基因完整的读码框架。采用序列同源性分析方法,结果显示新疆盐角草orf25基因与甜菜线粒体同源性高达98%,与烟草线粒体同源性达到95%,与小麦同源性为92%,与玉米同源性为88%,表明orf25 基因在植物中是高度保守的一种基因, 同时说明野生植物盐角草中也存在与农作物相似的雄性不育相关基因,orf25 基因编码的功能性蛋白可能在影响植物雄性不育改良作物品种方面具有重要的意义。     

鼠卵透明带3在Pichia pastoris酵母中的分泌表达

本研究通过酵母Pichiapastoris表达鼠卵透明带 3(mZP3)蛋白 ,获得控制害鼠生育研究的抗原物质。根据国际基因库已发表的mZP3基因序列设计引物 ,并分别在 5’引物和 3’引物中引入EcoRI和XbaI酶切位点。经PCR扩增 ,将mZP3克隆至穿梭质粒pGAPZαA上 ,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA mZP3经线性化后 ,采用LiCl法转入毕赤酵母SMD1 1 68菌株中 ,Zeocin+ 筛选阳性克隆 ,酵母发酵上清液进行SDS PAGE和Western blot检测 ,结果表明mZP3在酵母中得到了特异性表达 ,表达产物的分子量约为 60kDa ,说明mZP3能够在酵母真核系统中成功表达 ,并可以用作mZP3免疫不育控制鼠害的检测抗原。