东亚三角涡虫Djtraf3基因的时空表达模式

肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)作为TRAF家族的成员之一,通过介导TLRs信号通路,参与动物的免疫反应。通过构建东亚三角涡虫Djtraf3的cDNA文库获得Djtraf3基因并分析基因结构。结果发现,该最大开放阅读框为564bp,编码的蛋白质含187个氨基酸,含有1个TRAF结构域。进化分析表明,DjTRAF3和果蝇的TRAF3聚群,位于进化树的基部;整体原位杂交结果显示,在涡虫成体及不同再生阶段,Djtraf3在整个肠部表达。这些结果为进一步探究其功能提供了依据和方向。     

东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry的表达和酶活分析

通过对东亚三角涡虫胰蛋白酶Djtry氨基酸序列比对分析, 发现保守的催化三联体结构中第一位的His被Lys所取代。为了探究这种突变是否会对胰蛋白酶的活性有影响, 文章构建了原核表达重组质粒pET-28a- Djtry, 转化到E.coli BL21中, 利用IPTG诱导表达, 对表达的重组蛋白进行变性、复性、纯化以及Western blotting鉴定, 获得成分均一的活性蛋白。利用牛胰蛋白酶为标准品, 胰蛋白酶特异性底物BAEE, 检测Djtry酶活力与比活力。SDS-PAGE电泳表明诱导表达的融合蛋白为包涵体, 分子量约为26 kDa, Western blotting结果显示为目的蛋白, 对复性纯化的目的蛋白进行酶活检测发现, 突变型胰蛋白酶Djtry仍然保持了胰蛋白酶催化性质, 但是催化活性相对较弱。