TRV介导的溪荪VIGS转化体系的构建与鉴定

病毒诱导基因沉默（Virus-induced gene silencing,VIGS）技术为缺乏稳定遗传转化体系的植物进行基因功能分析提供了可能，为解决缺少稳定遗传转化体系的植物进行基因功能验证的需求，以单子叶植物溪荪（Iris sanguinea）为材料，克隆IsPDS基因的特异性片段并构建其VIGS重组载体pTRV2-IsPDS，通过注射法侵染溪荪叶片，结果显示：pTRV1和pTRV2-IsPDS的菌液OD600调至1.8～2.0后重悬，重悬液OD600调至0.8～1.0，通过注射器叶脉注射方式侵染溪荪叶片效果最佳。在室外温度为15～20℃的下午6～8时进行，用1 mL注射器针头扎伤溪荪叶片外表皮，沿着平行脉缓慢注射重悬液1 mL至溪荪叶片维管束中，14 d左右会出现明显的白化表型。在出现表型变化的植株和空载组中均检测到TRV1和TRV2的病毒载体，白化植株的IsPDS表达量显著低于对照组。侵染液配制中通过提高携带病毒载体的农杆菌的浓度提高侵染效率，且接种后无需遮光。