金雀异黄素抑制IL-1α刺激破骨样细胞的组织蛋白酶K表达

从人骨巨细胞瘤组织中纯化破骨样细胞,用不同浓度的金雀异黄素温育48h,观察IL-1α刺激后1h后组织蛋白酶K表达。结果发现:与阴性对照组相比,IL-1α明显刺激破骨样细胞表达组织蛋白酶K(P<0.01);而金雀异黄素抑制IL-1α刺激后组织蛋白酶K转录及表达,且呈剂量依赖关系(P<0.01);加用雌激素受体拮抗剂ICI182.780后,金雀异黄素作用被部分拮抗。金雀异黄素通过雌激素受体部分抑制IL-1α刺激破骨样细胞的组织蛋白酶K表达。     

肺炎支原体感染大鼠肺组织中PDGF-BB变化的免疫组织化学研究

为探讨血小板源性生长因子 - BB(PDGF- BB)在肺炎支原体反复肺感染导致肺间质纤维化的发病机制中的作用 ,作者于 2 4周内给大鼠反复 9次吸入肺炎支原体复制慢性肺感染模型。随后用 PDGF- BB单克隆抗体按 SABC法行免疫组织化学染色和定量图像分析 ,以观察肺组织 PDGF- BB蛋白质水平表达的变化。结果显示 :(1)感染组动物 (n=4)支气管肺泡灌洗液肺炎支原体 - PCR检测均为阳性 ,而对照组 (n=4)和感染加红霉素治疗组动物 (n=4)均为阴性 (P<0 .0 5 ) ;三组动物的支气管和肺组织常规细菌培养结果均为阴性 ;感染组动物透射电镜检查见肺泡间隔增宽 ,其中有较多胶原纤维堆积 ,其余两组则未见明显异常。 (2 )感染组动物肺间质结缔组织内、支气管壁和小血管壁内可见较强的 PDGF- BB阳性染色 ,其积分光密度为 37.90± 10 .14(n=4) ,显著高于对照组者 (7.5 4± 1.98,n=4,P<0 .0 5 )和感染加红霉素治疗组者 (10 .90± 3.30 ,n=4,P<0 .0 5 )。提示肺炎支原体反复肺感染的 PDGF- BB蛋白质水平表达增加 ,可能参与肺间质纤维化的发病过程     

酶法催化降解2,4,6-三硝基甲苯的研究进展

2,4,6-三硝基甲苯(TNT)作为一种广泛使用的含能材料,发挥巨大作用的同时也给环境带来了严重的污染,对人类健康构成一定威胁。目前国内外的TNT处置主要有物理、化学、生物及酶法等方法,其中酶法作为一种新兴的方法,显示了良好的应用潜力,受到研究者的广泛关注,。比较了各类处理方法的优缺点,重点介绍近年来涉及TNT降解的酶学研究进展,并对酶法在TNT废水处理和土壤修复中的应用前景进行展望。     

异戊烯基化吲哚类生物碱的化学酶合成

异戊烯基化吲哚类生物碱广泛存在于麦角菌、青霉菌和曲霉菌中,具有一定的药理学活性,与未异戊烯基化的前体在生物活性方面具有明显的差异.曲霉菌中的某些异戊烯基化吲哚类生物碱具有抗癌活性,如烟曲霉毒素C（fumitremorgin C）、tryprostatin B,但其天然产量低且不易分离,利用化学酶合成法可很容易地将前体转化为异戊烯基化吲哚类生物碱.异戊烯基转移酶FtmPT1对二甲丙烯基二磷酸（dimethylallyl diphosphate,DMAPP）具有专一性,但可以接受不同的芳香族底物.早期研究发现,FtmPT1能接受含色氨酸的不同环二肽为底物,但以cyclo-L-Trp-L-Tyr和cyclo-L-Trp-L-Phe为底物时,酶的相对活性很低,其产物量少,无法用于合成产物.本实验通过优化酶反应条件来提高其产量.将已构建的含ftmPT1的质粒在大肠杆菌中诱导表达,经Ni-NTA亲和柱纯化后用于酶反应.实验结果表明,通过增加酶量（终浓度2.8 μmol/L）、延长培养时间（37 ℃,24 h）,以cyclo-L-Trp-L-Tyr和cyclo-L-Trp-L-Phe为底物的酶反应产率分别达到49.3%和21.3%,产物经¹H^-NMR、¹H-¹H-COSY和ESI-MS鉴定,其结果与预期吻合.据检索,这2个化合物均为新化合物,分别命名为cyclo-C2-1′-DMA-L-Trp-L-Tyr和cyclo-C2-1′-DMA-L-Trp-L-Phe.     

多药耐药基因分型芯片的制备及优化

目的:建立多药耐药基因(mdr1)分型芯片,以检测患者的单核苷酸多态性(SNPs)。方法:设计并合成探针和引物,制备芯片;构建野生型和突变型质粒,以其为模板经PCR仪扩增后,与芯片上的探针杂交,并用扫描仪分析结果。结果:构建了野生型和突变型质粒,与芯片杂交能很好地区分基因型;优化了制备条件,建立了分型标准。结论:该基因芯片是一种快速特异的基因分型方法。     

哺乳动物中丙酮酸脱氢酶复合体的活性调节

高等生物的一个重要代谢调控机制是通过对酶的磷酸化和去磷酸化来进行的,哺乳动物的丙酮酸脱氢酶复合体(pyruvate dehydrogenase complex,PDHc)也是如此。PDHc的活性的调节主要是通过对其E1(pyru-vate dehydrogenase,PDH)的磷酸化和去磷酸化来实现的。当机体主要靠储存的脂肪生存而所存的葡萄糖仅供大脑和神经组织等只能依靠葡萄糖来提供能量的器官使用的时候,即葡萄糖缺乏时,就需要抑制PDHc的活性。主要探讨了哺乳动物在特定器官中和特定的一些生理条件下,PDHc活性改变的一些规律。     

生物化学探究式教学的设计和实施

在2010～2012年间,以生命科学学院基地班学生为学习主体,进行了生物化学探究式教学活动。该活动以生物化学经典文献为主要研习资料,通过学生自主学习、小组研讨和全班交流等方式,培养学生的自学能力、文献阅读能力、演讲与交流能力以及团队合作精神,对于拓宽学生眼界、激发学习兴趣、培养科学思维和情操起到很好的促进作用。     

嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能

Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用,参与电子传递和基因调节等过程. 以嗜热菌HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因. 将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒sufS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1. 重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化. 研究证明,SufS具有脱硫酶活性,而SufE的存在可增强其活性. 体外重组实验表明,在60 ℃孵育SufS和SufE 1.0～2.5 h,其复合体脱硫酶活性约是单体SufS的2倍,但两者相互作用时间短暂. 若通过交联剂Mts Atf Biotin使SufS与SufE共价连接,此时SufSE酶活性是SufS的6倍左右,并可持续72 h.     

从人骨巨细胞瘤组织中纯化破骨细胞的简单方法

利用破骨细胞贴壁快以及耐胰蛋白酶地特性,采用0.25%胰蛋白酶和0.2%I型胶原酶来分离纯化骨巨细胞中的破骨细胞,即得到破骨细胞,并进行细胞学和分子生物学鉴定,包括抗酒石酸酸性磷酸酶染色和HE染色,并采用RT-PCR反应方法检测降钙素受体、组织蛋白酶K和破骨细胞分化因子受体的表达。该方法所得细胞纯度可达79.7%,具有破骨细胞表型特征。可用于生化和分子生物学研究,是进行骨细胞学研究的破骨细胞来源。     

嗜热菌Lon蛋白酶的逆境应答作用及其功能分析

Lon蛋白水解酶广泛存在于微生物以及动植物体内.它除了水解蛋白质的功能以外,还参与到细胞生理过程的调节当中.以嗜热栖热菌HB8(Thermus thermophilus HB8)的Lon蛋白酶(TTLon)及其两个片段TTlonL和TTlonS为研究对象,采用RT-PCR技术证明了TTLon在嗜热栖热菌HB8的逆境应答过程中发挥着重要作用,它的蛋白酶活性是受到Mg2+影响的,失去C端的TTlonL和TTlonS没有了蛋白水解酶活性和分子伴侣活性,但是它们仍然具有一定的ATP结合能力.