λgtlSfi-Not作载体构建兔输卵管上皮细胞表达型cDNA文库

λｇｔｌＳｆｉ┐Ｎｏｔ作载体构建兔输卵管上皮细胞表达型ｃＤＮＡ文库刘传聚沈虹顾正吕吉宁左嘉客（中国科学院上海细胞生物学研究所,上海２０００３１）兔输卵管上皮细胞合成并分泌的某些蛋白组份具克服小鼠早胚发育阻断的功能〔１,２〕．利用“功能缺失”分析从...     

克服早胚发育阻断的兔输卵管因子“DPF-1”的初步研究

兔64 kDa输卵管蛋白(DPF-1)具克服小鼠早胚发育阻断的作用。进一步分析的结果表明DPF-1的等电点介于7.2-8.1;其合成与分泌对雌激素或孕激素无明显依赖性,能穿越透明带,紧密附着在早胚细胞膜周围。借助于Western blotting分析法,发现DPF-1的分布具组织专一性,仅存在于输卵管,而新西兰白兔子宫、卵巢、肝脏、心脏、肺、脾脏、骨骼肌、小肠和脑等组织中皆未发现;在所检测的小鼠和金黄田鼠输卵管中,也显示出DPF-1相关分子,小鼠的为71 kDa和32 kDa输卵管蛋白,金黄田鼠的为68 kDa和49 kDa输卵管蛋白。值得注意的是,以DPF-1主动免疫的雌性小鼠,经交配,输卵管中的44.8%早胚发育遭阻断,提示DPF-1在克服早胚发育阻断并实现由母型向合子型基因调控过渡的过程中可能起决定性作用。     

兔输卵管蛋白具有组织特异性而没有种属特异性

哺乳动物输卵管为配子的最终成熟、配子的运输、受精及早期胚胎发育提供了一个独特的、适宜的环境。可以推测：输卵管粘膜上皮细胞分泌的某些蛋白参与了这些过程。有证据表明：输卵管粘膜上皮细胞分泌因子与克服发育阻断作用的现象“相关”。而且,这些因子在功能上无种属专一性。我们则进一步发现：输卵管因子能克服早期胚胎发育阻断。通过纯化兔输卵管上皮细胞分泌蛋白,制备针对各种不同蛋白组份的多抗血清。进行抗体封闭实验。结果表明：抗６４ｋＤ输卵管蛋白（ＤＰＦ－１）多抗血清能完全阻断体外早期胚胎的正常发育,阻断率达１００％。另外,鼠ＤＰＦ－１抗血清的用量与小鼠早期胚胎体外发育阻断率呈一定的剂量效应关系。Ｉｎｖｉｖｏ抗生育实验,即通过主动免疫雌性小鼠,亦证实ＤＰＦ－１具有克服早期胚胎发育阻断的作用。凡经免疫的雌性小鼠,怀孕后检查发现,近半数的早期胚胎发育均遭阻断,这就进一步表明了ＤＰＦ－１在克服早期胚胎发育阻断并实现由母型向合子型调控过渡过程中的作用。为了深入研究ＤＰＦ－１的理化特性和生物学行为,本文对ＤＰＦ－１进行了初步纯化,并制备了ＤＰＦ－１单抗。选择健康、性成熟、雌性新西兰白兔经自然发情、交配后,１７小时处死。取出输卵管上皮细胞、     

兔输卵管蛋白具有组织特异性而没有种属特异性

哺乳动物输卵管为配子的最终成熟、配子的运输、受精及早期胚胎发育提供了一个独特的、适宜的环境。可以推测：输卵管粘膜上皮细胞分泌的某些蛋白参与了这些过程。有证据表明：输卵管粘膜上皮细胞分泌因子与克服发育阻断作用的现象“相关”。而且,这些因子在功能上无种属专一性。我们刚进一步表现：输卵管因子能克服早期胚胎发育阻断。通过纯化兔输卵管上皮细胞分泌蛋白,制备针对各种不同蛋白组份的多抗血清,进行抗体封闭实验。结果表明：抗64kD输卵管蛋白（DPF－1）多抗血清能完全阻断体外早期胚胎的正常发育,阻断率达100％。另外,鼠DPF－1抗血清的用量与小鼠早期胚胎体外发育阻断率呈一定的剂量效就关系。In vivo抗生育实验,即通过主动免疫雌性小鼠,亦证实DPF－1具有克服早期胚胎发育阻断的作用。尺经免疫的雌性小鼠,怀孕后检查发现,近半数的早期胚肥发育均遭阻断,这就进一步表明了DPF－1在克服早期胚胎发育阻断并实现由母型向合子型调控过渡过程中的作用。为了深入研究DPF－1的理化特性和生物学行为,本文对DPF－1进行了初步纯化,并制备了DPF－1单抗。选择、性、雌性新西兰白兔经自然发情、交配后,17小时处死。取出输卵管上皮细胞、洗涤,于CB741－A(鞠血清、无蛋白、无次黄嘌呤培养液）中培养48小时后收集培养液,离心,取上清液（即为条件培养液）。调pH,酒精沉淀。离心,将收集的蛋白作10％SDS－PAGE分离,KCL负染后,切取64kD蛋白（DPF－1）条带。以此为抗原,免疫BALB／C小鼠,按常规方法合脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞,经过ELISA初步筛选和Westernblotting再次筛选,最终获两株小鼠抗DPF0－1单抗,并对它们进行了鉴定（Table1)。两种抗体均为IgM类型;专一识别DPF－1条带;接种于BALB／C小鼠腹腔之后,腹水滴度均达1：1,000,000。经Western blotting分析发现：DPF0－1具有组织特异性而没有种属特异性。在所检测的新西兰白免中,DPF－1仅存在于输卵管中,而肾脏、卵巢、大脑、心脏、骨骼肌、子宫、脾脏、肝脏和小肠等组织中均未发现（Fig.1);在所检测的小鼠和金黄田鼠输卵管中,也显示含有DPF－1相关分子,小鼠有7kD和32kD两种,金黄田鼠有49kD和68kD两种（Fig.2)。我们试将DPF－1单抗初步应用于检测方面。结果表明：亲和力、灵魂度、重复性和专一性方面均令人满意。DPF－1单抗的制备对DPF－1的分离纯化和研究提供了有力的工具。     

输卵管特异糖蛋白研究进展

输卵管不仅为生殖细胞的转运、成熟、受精及胚胎的早期发育提供了一个合适的环境,其某些分泌成份可能在这些重要的发育事件中承担着不可替代的作用。为了弄清输卵管分泌成份的生物学功能,提高体外受精(IVF)和早胚发育的质量,研究人员进行了大量的工作。最初人们的注意力主要集中在输卵管中氨基酸、葡萄糖、丙酮酸及阳性离子等组份上,但随着研究的深入,研究的焦点逐渐转     

克服早胚发育阻断的兔输卵管因子“DPF—1”的初步研究

兔６４ｋＤａ输卵管蛋白（ＤＰＦ－１）具克服小鼠早胚发育阻断的作用。进一步分析的结果表明ＤＰＦ－１等电点介于７．２－８．１;其合成与分泌对雌激素或孕激素无明显依赖性,能穿越透明带,紧密附着在早胚细胞膜周围。借助于Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析法,发现ＤＰＦ－１的分布具组织专一性,仅存在于输卵管,而新西兰白兔子宫、卵巢、肝脏、心脏、肺、脾脏、骨骼肌、小肠和脑等组织中皆未发现;在所检测的小鼠和金黄