源自大黄鱼肠道柠檬酸杆菌的外切几丁质酶的特性分析（英文）北大核心CSCD

【目的】从饲喂富含几丁质饲料的大黄鱼肠道分离具有几丁质分解功能的菌株并分离鉴定新的几丁质酶。【方法】利用胶体几丁质平板分离饲喂杂鱼的大黄鱼肠道中的几丁质分解菌。对几丁质酶基因chi-X进行了克隆并在大肠杆菌中表达。对CHI-X的酶学性质进行了分析。【结果】从饲喂杂鱼的大黄鱼肠道内容物中分离出1株具有几丁质分解功能的费氏柠檬酸杆菌,其中的几丁质酶基因编码1个含493个氨基酸残基的蛋白,其中包含一个糖苷水解酶18家族催化域。CHI-X对胶体几丁质具有分解功能。最适p H和温度分别是4.0和60°C。CHI-X具有很强的pH稳定性,在pH 3.0–11.0的范围培育1 h仍保留90%左右的活性。Mn^(2+),Li^+和K^+可促进CHI-X酶活,Ag^+对CHI-X有抑制作用。CHI-X对蛋白酶和石斑鱼肠道内容物有较强的抗逆性。CHI-X可分解胶体几丁质为N-乙酰葡萄糖胺和N-乙酰葡萄糖胺二聚体,表明它是一个几丁质外切酶。最后,CHI-X和另一个几丁质酶Chi565表现出酶活性的加和效应。【结论】分离自肠道菌的CHI-X能很好适应海水鱼类的肠道环境,可以作为温水海水养殖鱼类的饲料添加剂使用。     

一种具有高β-葡聚糖酶活性的几丁质外切酶基因的克隆、表达和性质鉴定

【目的】表达并鉴定来源于维氏气单胞菌的几丁质酶Chi92并研究其作为水产饲用酶的有效性。【方法】自A.veronii B565中克隆chi92基因并在Pichia pastoris GS115中进行表达,对表达成功的Chi92进行分离纯化和生化鉴定。最后将Chi92添加到含有毕赤酵母粉的饲料中饲喂斑马鱼2周,研究Chi92添加对斑马鱼生长、饲料利用率、肠道微绒毛形态和抗病性能的影响。【结果】chi92基因编码具有864个氨基酸残基的多肽。Chi92在p H 6.0和40°C时表现最佳酶活。Chi92对蛋白酶有抗性,同时酶活不受金属离子显著影响。Chi92具备高几丁质酶活(69.4 U/m L)。以胶体几丁质和β-1,3-1,4-葡聚糖作为底物时,比活力分别为809.2 U/mg和235.6 U/mg。薄层层析和电喷雾电离质谱联用技术均表明N-乙酰葡糖胺二聚体是Chi92酶解胶体几丁质的主要产物。Chi92在对酵母细胞壁的降解方面比其他几丁质酶性能更加优良。经过2周饲喂,添加有Chi92的饲料显著提高了斑马鱼肠道微绒毛的高度和密度,同时斑马鱼的生长,饲料利用率,以及抗病性能均得到了一定提高。【结论】Chi92具有p H稳定性、抗逆性和高酵母细胞壁降解功能,能较好地作为饲用酶用于温水水产养殖。     

硝基苯对蚕豆根尖细胞凋亡的影响

细胞凋亡(apoptosis)是一自然生理过程。是由一个主动由基因决定的自动结束生命的过程。由于细胞凋亡受到严格的由遗传机制决定的程序性调控,所以也常常被称为细胞程序性死亡(PCD,programmed cell death)。植物在正常发育时也会发生细胞程序性死亡,     

维氏气单胞菌B565β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的表达、纯化及酶学性质

以维氏气单胞菌B565基因组DNA为模板,扩增得到β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶nag565基因,构建nag565-p ET28a表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。经过分析与预测,nag565氨基酸序列与其他气单胞菌属相似,NAG565蛋白序列分析预测其含有一个信号肽、一个碳水化合物结合结构域、两个糖苷水解酶20家族催化结构域和一个β-氨基葡萄糖苷酶C端结构域。通过NiNTA纯化获得的NAG565纯蛋白比活为7328U/mg,并对其酶学性质进行了初步研究,NAG565在p H7.0保持最高活性,并且在p H5.0~9.0范围内稳定,最适温度为37℃,0~30℃对其酶活无明显影响,并对多种金属离子和蛋白酶具有良好抗性,符合水产动物的养殖环境条件(养殖温度20~30℃,多数养殖鱼胃肠道p H值呈中性并含有蛋白酶),为其在水产养殖等领域的应用提供了理论基础。     

基于低场核磁共振T1-T2谱技术定性和定量分析罗非鱼各组织的方法探究

形体指标的检测是鱼类常规营养评定的重要组成部分。目前,分析鱼类组织体重比的方法会对鱼体造成损伤,且取样过程复杂,迫切需要无损快速检测技术分析鱼体组织占比。低场核磁共振技术具有快速无损检测的特点,已有研究利用低场核磁共振T1谱技术检测小鼠内脂肪组织体积,但尚未有研究应用低场核磁共振T1-T2谱技术对鱼类各组织器官进行定性和定量分析。基于此,利用低场核磁共振T1-T2谱技术,将分离后的罗非鱼的肌肉组织、腹腔脂肪组织、肝脏组织、肠道组织单独以及混合后进行扫描分析,结果发现利用低场核磁共振T1-T2谱技术可以分离罗非鱼肌肉组织和腹腔脂肪组织,但是无法区分肝脏组织和肠道组织。进一步对能够实现分离的肌肉组织和脂肪组织建立定量分析的模型,分析罗非鱼组织信号强度与组织重量相关性,结果显示,肌肉组织相关性R2=0.974 3,腹腔脂肪组织相关性R2=0965 0。并利用罗非鱼活体验证了肌肉组织定量分析模型的可靠性,将活体扫描肌肉信号大小转换成肌肉组织重量并分析其与全鱼体重相关性,结果显示肌肉组织重量与体重相关性R2=0.806 9。研究表明,在鱼类营养代谢研究中,可以利用低场核磁共振T1-T2谱技术快速无损地定量分析鱼体内肌肉组织含量。     

两种不同植物甾醇酯降血脂效果的比较研究

目的：研究两种不同植物甾醇酯对高脂血症大鼠的降血脂作用,并比较其差异。方法：通过饲喂高脂饲料,建立高脂血症大鼠模型,将建模成功的大鼠,按照TC水平随机分成8组,即模型对照组,溶剂对照组,Vegapure 95FF低、中、高剂量组,Vegapure 95E低、中、高剂量组,同时设立空白对照组。干预4周后,记录体重、进食量,并检测血清TC、LDL-C、TG、HDL-C、脂肪重量及体脂率、肝脏重量及肝脏指数等指标。结果：在实验剂量下,两种植物甾醇酯均明显降低血清TC、LDL-C,但均未发现有剂量效应关系;两种植物甾醇酯对血清TG、HDL-C无明显影响。两种植物甾醇酯对高脂血症SD大鼠体重增长、进食量、脂肪重量、体脂率、肝脏重量和肝脏指数均无明显影响。结论：两种植物甾醇酯在降低血脂、大鼠生长发育、体质和肝脏方面均无明显差异。     

腹腔注射乙酸钠对斑马鱼食欲调控基因及胰岛素分泌基因的影响

肠道微生物菌群发酵体内不易消化的碳水化合物可以产生乙酸。哺乳动物中,乙酸被报道可增加宿主食欲,改善葡萄糖平衡以及胰岛素敏感性。然而水产动物中乙酸盐相关作用及机理研究较少。以斑马鱼为研究对象,腹腔注射不同浓度乙酸钠发现,斑马鱼中促进摄食的基因表达量显著升高,而对抑制摄食基因的表达量没有显著影响,说明乙酸钠能够提高斑马鱼的食欲。另一方面,研究发现腹腔注射斑马鱼2 h、4 h、6 h后,肝脏及肠道促进胰岛素分泌基因表达水平也有显著性上升,说明乙酸钠对于胰岛素分泌具有促进作用。研究结果表明在水产动物中乙酸钠能够提高食欲并促进胰岛素的分泌,研究结果阐述了乙酸盐对水产动物生长的作用机理,以期为乙酸钠在生产中的应用提供依据。