Toll样受体3抑制人类巨噬细胞感染HIV的机制研究

Toll样受体（Toll like receptor,TLR）是固有免疫系统中的病原模式识别受体,在巨噬细胞抗感染免疫中发挥重要作用。TLR3特异性识别双链RNA,诱导细胞内多重信号传导,引发巨噬细胞产生抗病毒活性。本研究以TLR3激活剂多聚次黄苷酸-胞苷酸（polyinosinie：polycytidylic acid,Polyl：C）刺激人类巨噬细胞,发现能显著抑制胞内HIV病毒感染和复制。Poly I：C刺激后,巨噬细胞I型干扰素（interferon,IFN）和抗HIV胞嘧啶脱氨酶（APOBEC3G,A3G）表达水平显著上调;且具有抗HIV作用的MicroRNA（miRNA-28,125b,150,223,and382）的表达也显著上调。本研究初步揭示了TLR3激活后抗HIV感染的机制。     

汉滩病毒M片段的核苷酸序列变异和系统发生树分析

The total RNA was extracted from two clinical blood samples of HFRS patients and the RNA was amplified by RT-PCRThe amplified DNA fragment of sample 613 involved nucleotides 1,471-1,873,and the sample 226 involved 540-1,244 nucleotides of M fragment of Hantaan virusThen the amplified PCR products were sequenced directlyThe sequencing results demonstrated that there was 84% identity between sample 613 and HV114 virus strain,but was 99% between sample 613 and HTN76-118 strainHowever,in sample 226,there was 95% sequence identity with HV114,82% with HTN76-118The results of phylogenetic tree analysis showed that HV613 was located in the same linage with HTN76-118,the HV226 was in the same linage with HV114 and A9 strains     

喷昔洛韦体外抗疱疹病毒活性的研究

为评价新合成的喷昔洛韦的细胞毒性和抗疱疹病毒活性,通过观察病毒感染细胞的CPE、病毒滴度、抗病毒指数,从而判定喷昔洛韦的抗疱疹病毒作用.结果发现喷昔洛韦对HEL细胞、Hep-2细胞的半数中毒浓度(TD\-50)分别为105.2μg/mL和85.1μg/mL;对HSV-1、HSV-2、VZV、HSV-1吴株的平均半数抑制浓度(IC\-50)分别为21.78μg/mL、20.15μg/mL、23.19μg/mL和17.87μg/mL,对各毒株的治疗指数分别为5.84、6.31、5.49和7.11.故喷昔洛韦是一种有效体外抗疱疹病毒药物.     

Ⅲ型干扰素——新型抗病毒细胞因子

干扰素（IFN）是抗病毒感染的第一道防线,Ⅰ型和Ⅱ型干扰素不仅可抑制病毒,而且还能参与天然免疫反应和获得性免疫反应。最近干扰素家族增添一位新成员：Ⅲ型干扰素,即IFN-λ,因其具有类似干扰素的抗病毒活性且能诱导干扰素相关基因的表达而命名。IFN-λ受体与Ⅰ型干扰素的受体不同,但具有与Ⅰ型干扰素类似的诱导表达方式和信号转导通路,并能激活一系列相似的干扰素刺激基因。就IFN-λ家族及其受体、基因表达和信号转导机制、抗病毒作用等进行综述。     

恒河猴感染SARS病毒致病模型的建立

为建立恒河猴严重急性呼吸道综合征(SARS)的模型并对其致病特点进行观察,采用病毒分离、免疫荧光、光镜及RT-PCR方法对病毒感染组和非感染组恒河猴不同时间、不同组织或分泌物进行检测。结果显示从恒河猴不同组织中分离到病毒,而且在病毒感染后第2d和第5d的血液、第7、9d的鼻咽分泌物、第3d的粪、第5d的粪尿中均检测到SARS-CoV RNA。光镜观察到病毒感染组肺组织肺泡问隔增宽,有大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡腔有渗出,甚至形成透明膜样物;多个肺泡形成机化性肺炎的表现。感染组肝组织可见较大的坏死灶,并伴有大量炎性细胞浸润。结论认为已成功建立了恒河猴SARS模型,可用于评价抗SARS药物和疫苗的研究。     

湖北省不同地区汉坦病毒M片段的分析研究

参考汉坦病毒（ＨＶ）的基因文库软件设计Ｍ片段Ｇ－１区型特异性引物,以ＨＶ　７６／１１８、Ｈ－１１４、Ａ－９及Ｒ－｛２２｝株ＲＮＡ为阳性模板,建立ＨＶ的分型方法──逆转录一半巢式聚合酶链反应（ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ）,对湖北省不同地区分离的３０株ＨＶ进行分　型。结果显示：（１）建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ分型方法对ＨＶ两型的代表株７６／１１８（ＨＴＮ）、Ａ－９（ＨＴＮ）、Ｈ－１１４（ＨＴＮ）及Ｒ－｛２２｝（ＳＥＯ）ＲＮＡ进行了特异性扩增,其大小与理论值一致;此　法只能检测ＨＶ　ＲＮＡ,不能检测其它病毒ＲＮＡ。（２）分离于湖北省不同地区的３０株ＨＶ的分型结果　为汉滩型２１株、汉城型９株,其中长江以南汉滩型１２株、汉城型２株;长江以北汉滩型９株、　汉城型７株。这表明建立的ＲＴ－ｈｅｍｉｎｅｓｔｅｄ　ＰＣＲ用于ＨＶ的检测特异性好;分析湖北省不同　地区分离的３０株ＨＶ,显示湖北省ＨＦＲＳ流行为混合疫区;且在湖北地区具有一定的地理聚集性。     

湖北省不同地区汉坦病毒M片段的分析研究

参考汉坦病毒(HV)的基因文库软件设计M片段G1区型特异性引物,以HV 76/118、H-114、A9及R22株RNA为阳性模板,建立HV的分型方法--逆转录一半巢式聚合酶链反应(RT-heminested PCR),对湖北省不同地区分离的30株HV进行分型.结果显示(1)建立的RT-heminested PCR分型方法对HV两型的代表株76/118(HTN)、A9(HTN)、H-114(HTN)及R22(SEO)RNA进行了特异性扩增,其大小与理论值一致;此法只能检测HVRNA,不能检测其它病毒RNA.(2)分离于湖北省不同地区的30株HV的分型结果为汉滩型21株、汉城型9株,其中长江以南汉滩型12株、汉城型2株;长江以北汉滩型9株、汉城型7株.这表明建立的RT-heminested PCR用于HV的检测特异性好;分析湖北省不同地区分离的30株HV,显示湖北省HFRS流行为混合疫区;且在湖北地区具有一定的地理聚集性.     

恒河猴感染SARS病毒致病模型的建立

为建立恒河猴严重急性呼吸道综合征(SARS)的模型并对其致病特点进行观察,采用病毒分离、免疫荧光、光镜及RT-PCR方法对病毒感染组和非感染组恒河猴不同时间、不同组织或分泌物进行检测.结果显示从恒河猴不同组织中分离到病毒,而且在病毒感染后第2d和第5d的血液、第7、9d的鼻咽分泌物、第3d的粪、第5d的粪尿中均检测到SARS-CoV RNA.光镜观察到病毒感染组肺组织肺泡间隔增宽,有大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡腔有渗出,甚至形成透明膜样物;多个肺泡形成机化性肺炎的表现.感染组肝组织可见较大的坏死灶,并伴有大量炎性细胞浸润.结论认为已成功建立了恒河猴SARS模型,可用于评价抗SARS药物和疫苗的研究.