马蔺IlWRKY28基因的克隆与表达分析

马蔺(Iris lactea var. chinensis)是鸢尾属多年生草本盐生植物,具有很高的耐盐性和观赏价值。为研究马蔺耐盐的分子机制,通过cDNA末端快速扩增技术(RACE)从马蔺中克隆到一个WRKY转录因子基因IlWRKY28,获得了1 302 bp的全长cDNA序列,其包含一个108 bp 5′末端非翻译区(UTR),一个174 bp 3′末端UTR和一个1 020 bp开放阅读框。IlWRKY28编码339个氨基酸,预测的蛋白质分子量为37.22 kD,等电点为7.04。氨基酸序列分析显示,IlWRKY28包含一个保守的WRKY基序和一个C2H2型锌指结构域。系统发育分析表明,马蔺IlWRKY28与菠萝(Ananas comosus)AcWRKY28和藏北嵩草(Kobresia littledalei)ClWRKY28亲缘关系最近。荧光定量PCR分析显示,盐处理后,IlWRKY28基因在马蔺地上部显著上调表达。该研究结果为进一步研究IlWRKY28在马蔺适应高盐胁迫中的功能和作用机制奠定了重要的分子基础。     

6种植物提取物对酪氨酸酶活性的影响

近年来,中草药美容由于疗效显著、毒副作用小而风靡全球。与此同时,中外众多研究者从中国古代治疗皮肤病的方剂中筛选出多种中药,以现代实验手段探讨它们的作用机理,从而更有效地指导美容用品的研制开发,植物药对酪氨酸酶活性的影响便是其中的研究课题之一。已有证据表明,酪氨酸酶在黑色素生成过程中起着极为关键的作用,用药物调节酪氨酸酶的活性,能医治相关的皮肤病[1]。Ｙｕｋｉｍｉｔｓｕ等[2]选用26种在古方中用于皮肤增白的中药进行了酪氨酸酶活性的抑制性试验;雷铁池等[3]用计算机从古今中医治疗色素增加性皮肤病方剂中精选69首进…     

氮、磷、钾肥配施对甜菊生长、产量及糖苷相关指标的影响

为了探明甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的适宜施肥量,采用"3414"肥料试验设计对甜菊品种‘中山4号’(‘Zhongshan No.4’)的当年生扦插苗进行了盆栽实验,比较了不同氮(N)、磷(P_2O_5)、钾(K_2O)配施条件下甜菊产量相关指标(包括株高、茎粗、叶长、叶宽、叶中光合色素含量和单株叶干质量)及叶中糖苷[包括甜菊苷(St)、莱鲍迪苷A(R-A)和总苷]含量和单株积累量的差异,并对拟合的肥料效应方程进行了分析。结果表明:T2组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为300、200和600 mg·kg~(-1))的株高和叶中光合色素含量以及T6组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为600、300和600 mg·kg~(-1))的茎粗均最高;T9组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为600、200和900 mg·kg~(-1))的叶长以及T13组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为600、100和300 mg·kg~(-1))的叶宽均最大;T4组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为600、100和600 mg·kg~(-1))的单株叶干质量最高。T1组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为0、200和600mg·kg~(-1))的St含量略低于CK组(N、P_2O_5和K_2O施用量均为0 mg·kg~(-1)),但高于其余施肥处理组,并且多数施肥处理组的St含量显著低于CK组;T5组(N、P_2O_5和K_2O施用量分别为600、200和600 mg·kg~(-1))的R-A和总苷含量,T9组的St单株积累量以及T4组的R-A和总苷单株积累量均最高,且T5组的R-A和总苷单株积累量略低于T4组。极差分析结果表明:3种肥料中,氮肥对甜菊株高、茎粗、叶宽、叶中光合色素含量、单株叶干质量、St和R-A含量及R-A和总苷单株积累量的影响最大,而钾肥对其叶长、总苷含量和St单株积累量的影响最大。根据拟合的肥料效应方程,单株叶干质量为最高值(4.588 g)时,N、P_2O_5和K_2O施用量分别为701.11、160.20和793.91mg·kg~(-1);总苷含量为最高值(24.71%)时,N、P_2O_5和K_2O施用量分别为365.26、176.96和528.35 mg·kg~(-1)。综合考虑单株叶干质量和总苷含量,并结合拟合的肥料效应方程,适宜甜菊的N、P_2O_5和K_2O施用量分别为365.26~701.11、160.20~176.96和528.35~793.91 mg·kg~(-1)。     

甜菊不同杂交组合结实率及其F1代萌发和生长及对NaCl耐性的比较

以甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)的耐盐性较强品种‘中山3号’和‘守田2号’及R-A高含量品种‘中山4号’和‘守田3号’为亲本配置7个杂交组合并获得杂交种子,对种子结实率和发芽率及F1代幼苗的存活率进行统计分析,在此基础上采用砂培和水培方法比较了亲本及F1代扦插苗对NaCl胁迫的耐性.结果表明:品种间杂交组合的结实率均显著高于同系列品种间杂交及自交组合,其中‘守田2号’ב中山3号’杂交组合的结实率最高,为74.9％;7个杂交组合F1代的种子发芽率为63.8％ ～ 89.0％,差异明显;‘守田2号’ב中山4号’杂交组合F1代幼苗存活率相对较低(79.80％),其他杂交组合F1代幼苗存活率均在93％以上.砂培条件下,用100 mmol·L-1NaCl胁迫7d,各杂交组合F1代扦插苗的存活率差异不显著;随NaCl胁迫时间的延长各杂交组合F1代扦插苗的存活率均明显下降;胁迫28 d,‘守田2号’ב守田 3号’杂交组合以及‘中山3号’自交组合F1代扦插苗的存活率显著高于其他杂交组合.水培条件下,用100、150、200和250 mmol·L-1 NaCl胁迫14 d,‘守田2号’ב中山3号’、‘中山3号’ב守田2号’和‘中山3号’ב守田3号’3个杂交组合F1代扦插苗的存活率均显著高于其耐盐亲本及其他杂交组合.研究结果说明:通过杂交提高甜菊耐盐能力是可行的,而亲本的耐盐能力及亲本配置对杂交后代目标性状有较大影响;‘中山3号’ב守田2号’、‘守田2号’ב中山3号’和‘中山3号’ב守田3号’是耐盐性较强的甜菊优良杂交组合.     

NaCl胁迫对甜菊不同品种幼苗生长的影响

采用基质培养法,用含3.0、3.5、4.0、4.5和5.0 g·L-1NaCl的Knop营养液进行胁迫处理,对5个甜菊(Stevia rebaudiana Bertoni)品种幼苗的生长指标及其耐盐性进行了分析和评价.结果表明:在NaCl胁迫条件下,5个品种幼苗地上部分和地下部分的干质量、株高、根长、叶片数、叶片长度、叶片宽度以及主茎节数和分枝数等生长指标均低于对照,且随NaCl质量浓度的提高总体上呈逐渐降低的趋势,但不同品种各指标的降幅存在明显差异.NaCl胁迫对'中山3号'和'守田2号'幼苗地上部分和地下部分的干质量影响较小,对'中山2号'和'守田3号'幼苗地上部分和地下部分的干质量有较大影响.在NaCl胁迫条件下,5个甜菊品种幼苗的根冠比均大于对照;'中山2号'和'守田3号'幼苗的根冠比随NaCl质量浓度的提高呈先增大后减小的趋势,并在4.0 g·L-1 NaCl胁迫条件下达到最大;其他3个品种的根冠比均随NaCl质量浓度的提高呈现缓慢增加的趋势.NaCl胁迫对根长的抑制作用小于株高,对叶片长度的影响小于叶片宽度.相关性分析结果表明,甜菊幼苗的叶片数和分枝数与地上部分干质量的相关性显著,是导致地上部分干质量下降的重要原因.根据实验结果,供试甜菊品种按耐盐性从强至弱依次排序为 '中山3号'、'守田2号'、'中山4号'、'守田3号' 和'中山2号',其中'中山3号'和 '守田2号'耐盐性较强且各项生长指标均相对良好,可作为优良的甜菊耐盐种质资源进行深入研究.     

中华结缕草遗传分化的RAPD分析

中华结缕草 (ZoysiasinicaHance.)在我国是分布于东部沿海地区的一个受威胁禾草 ,形态上还有一个分布在海边的变种 ,长花中华结缕草 (Z .sinicavar.nipponicaOhwri)。采用 1 0条随机引物对采自我国不同地区 7个居群的 1 0 5个个体进行了RAPD扩增 ,对结果的AMOVA分析表明 ,中华结缕草组间遗传分化不显著 ,遗传变异只占总变异的 4.84% ,居群间遗传变异占总遗传变异的 2 4.71 % ,出现了显著的遗传分化 ,大部分变异存在于居群内部 ,占总变异的 70 .44%。不同数据处理方法得到了类似的结果 ,都支持哈迪 -温伯格平衡的假设。其中宁国汪溪居群和射阳海边居群变异最大 ,歙县新安江居群遗传变异最小。考虑到中华结缕草遗传结构和变异的这些特性 ,在取样策略、保护和育种方法上 ,都应该以群居为主 ,同时兼顾主要的异地居群     

荷兰鸢尾(Iris xiphium L. var. hybridum)的组织培养

取荷兰鸢尾（ＩｒｉｓｘｉｐｈｉｕｍＬ．ｖａｒ．ｈｙｂｒｉｄｕｍ）鳞茎片不同部位外植体块,接种于附加不同激素配比的基本培养基上,其中取自鳞茎片基部外植体块２ｍｍ×２ｍｍ×２ｍｍ,培养基为ＭＳ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的不定芽诱导率为最高（７０％）;最理想的增殖培养基为ＭＳ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。不定芽直径４～５ｍｍ,培养基为ＭＳ＋ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ有利于不定根的发生,诱导生根率达８３３％。试管苗不经练苗可直接出瓶,移栽于泥炭∶田土∶河沙＝１∶１∶１（Ｖ／Ｖ）的基质中。     

皱叶留兰香挥发油化学成分的GC-MS分析

采用水蒸汽蒸馏法从皱叶留兰香（Mentha crispate Schrad．）中提取挥发油,并运用气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行了分析。皱叶留兰香挥发油中鉴定出46种化学成分,占总挥发油的92％。其中含量最高的为2-甲基-5-（1-甲基乙烯基）-2-环已烯-1-酮（49．15％）、右旋柠檬烯（19．099％）、1-甲基-5-亚甲基-8-（1-甲基乙基）-1,6-环癸二3．749％）。     

柠檬酸和草酸对Pb胁迫下马蔺生长和生理的影响

采用营养液培养方法,研究了外源柠檬酸(0.5、5mmol.L-1)和草酸(0.5、5mmol.L-1)对不同浓度Pb(0、100、500mg.L-1)胁迫下马蔺(Irislactea var.chinensis)生长和生理的影响。结果表明,与单独Pb胁迫相比,加入5mmol.L-1的柠檬酸显著促进了马蔺株高的生长;草酸的加入缓解了500mg.L-1Pb胁迫对马蔺根生长的影响;加入0.5mmol.L-1的草酸缓解了500mg.L-1Pb胁迫对马蔺地上部生长的影响,并显著增加了100和500mg.L-1Pb胁迫下马蔺的地下部干质量;0.5mmol.L-1的柠檬酸能显著增加100mg.L-1Pb胁迫下马蔺叶片SOD酶活性;0.5和5mmol.L-1柠檬酸和0.5mmol.L-1草酸均能显著增加100mg.L-1Pb胁迫下马蔺体内POD酶活性;5mmol.L-1的柠檬酸和0.5mmol.L-1的草酸均缓解了500mg.L-1Pb胁迫对马蔺光合色素的影响;0.5和5mmol.L-1的柠檬酸和0.5mmol.L-1的草酸均能缓解由100和500mg.L-1Pb胁迫引起马蔺叶片细胞膜的损伤。     

蒙药孟根乌苏-18 味丸、孟根乌苏炮制品的肝肾毒性作用研究

目的:对比研究孟根乌苏(水银)-18味丸、孟根乌苏(水银)炮制品与硫化汞、氯化汞、氯化亚汞的肝肾毒性作用。方法:将Wistar雄性大鼠,根据体重随机分为正常对照组、孟根乌苏-18味丸低、高剂量组(0.29,2.9 g·kg~(-1)·d~(-1))、孟根乌苏-18味丸简化方组(0.26 g·kg~(-1)·d~(-1))、孟根乌苏炮制品低、高剂量组(0.033,0.33 g·kg~(-1)·d~(-1))、硫化汞组(17.39 mg·kg~(-1)·d~(-1))、氯化汞组(4.06 mg·kg~(-1)·d~(-1))、氯化亚汞组(35.3 mg·kg~(-1)·d~(-1)),共9组,每组6只。各组大鼠适应7天后,灌胃给药7天后分别检测肝肾功能,肝肾组织形态学变化,并用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)和电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)法测肾汞蓄积量,原位末端标记(TUNEL)法测肾细胞凋亡,免疫组化法测肾Ⅲ型胶原蛋白表达,实时荧光定量PCR(Real-Time-PCR)法检测肾脏MT-1、MT-2基因表达的变化。结果:在实验过程中,氯化亚汞组4只大鼠死亡,因此未对实验数据进行统计。大鼠连续7天给药后,药物对各组大鼠肝、肾功能并无影响。肝脏和肾脏病理检查结果表明,孟根乌苏-18味丸和孟根乌苏炮制品低剂量组肝细胞肿胀变性程度较轻,肾小球轻度肥大,肾小管上皮轻度肿胀变性,孟根乌苏-18味丸和孟根乌苏炮制品高剂量组以及硫化汞组大鼠肝脏、肾脏均出现了一定的病理变化,而氯化汞、氯化亚汞组大鼠肝肾病理变化更显著。与正常对照组和孟根乌苏炮制品低剂量组相比,氯化汞组大鼠肾汞蓄积量显著升高(P0.01);硫化汞、氯化汞组大鼠肾细胞凋亡率和Ⅲ型胶原蛋白表达显著升高(P0.01);与正常对照组比较,氯化汞组大鼠肾组织中MT-1和MT-2 m RNA表达显著升高(P0.01,P0.05);氯化汞组大鼠肾组织中MT-1表达显著高于孟根乌苏炮制品低剂量组(P0.01)。结论:临床常用量的孟根乌苏-18味丸和孟根乌苏炮制品肝肾毒性要远低于氯化亚汞、氯化汞。