疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶在毕赤酵母中的表面展示及酶学性质

【目的】构建疏棉状嗜热丝孢菌脂肪酶(Thermomyces lanuginosus lipase,TLL)在毕赤酵母GS115中的细胞表面展示体系,筛选展示成功且酶活力及展示率较高的重组子作为全细胞催化剂,并研究其酶学性质。【方法】克隆TLL基因tll,以酿酒酵母细胞壁蛋白Sed1p为锚定蛋白,构建表面展示载体pPICZαA-TLS。重组载体经SacⅠ线性化后转入毕赤酵母GS115中,经三丁酸甘油酯平板检测及摇甁发酵筛选获得高酶活力的毕赤酵母重组子,采用抗FLAG标签一抗和R-PE荧光素标记的二抗处理细胞后,进行荧光显微镜检测和流式细胞仪分析,并考察全细胞催化剂的最适反应温度和pH、金属离子耐受性等酶学性质。【结果】成功构建TLL毕赤酵母细胞表面展示体系,筛选到1株具有三丁酸甘油酯和橄榄油水解活力的克隆子,经1%的甲醇诱导发酵120 h后,水解橄榄油酶活力达257.8 U/g干细胞。经抗体处理后的重组菌发酵细胞在荧光显微镜下呈现强烈的红色荧光,流式细胞仪分析结果也证实脂肪酶被成功展示在酵母细胞表面,展示率达98.36%。展示的TLL作为全细胞催化剂水解对硝基苯酚丁酸酯(pNPB)的最适温度为30℃,最适pH为8.0,且具备良好的热稳定性和有机溶剂耐受性;K+、Ca2+、Mg2+对其有微弱的激活作用,Mn2+、Ni2+则有微弱的抑制作用,Cu2+的抑制作用较强,而EDTA、SDS、Tween 20对酶活力影响不明显。【结论】首次将TLL脂肪酶成功展示在毕赤酵母细胞表面,获得具有较高水解活力和良好酶学特性的全细胞催化剂,为表面展示TLL脂肪酶的规模化应用奠定了技术基础。     

明胶/纳米SiO2复合膜的体外抑菌试验

本实验测定了明胶、纳米SiO2、明胶/纳米SiO2复合膜对6种供试菌的抑菌效果,结果表明,明胶不具有抑菌作用;纳米SiO2对供试菌具有较好的抑茵效果;20种明胶/纳米SiO2复合膜材料中,有11种复合膜对供试菌具有较强的抑菌效果.用琼脂平板稀释法测定了具有较强抑菌作用复合膜的最低抑菌浓度(MIC),结果表明,最低抑菌浓度因膜的配比和菌种类型的不同而有所差异,为16.0 mg/mL～256.0 mg/mL.复合膜对蜡样芽孢杆菌的最低抑菌浓度(MIC)最大(256.0 mg/mL),而对其他供试菌相对较低,为64.0 mg/mL～128.0 mg/mL.     

幽门螺杆菌基因组结构特征研究进展

幽门螺杆菌是一类基因组结构变异很大的细菌,除具有共同的一般特征、看家基因、插入序列、致病岛、质粒外,还具有特殊的毒力基因,如尿素酶基因、鞭毛基因、粘连蛋白基因、vacA基因、cagA基因等。幽门螺杆菌基因组结构的不断阐明,为它的临床研究、流行病学研究以及预防和控制打下了坚实基础。     

超声乳化吸除联合人工晶体植入术治疗白内障的疗效及术后前房渗出的影响因素分析

摘要 目的：观察超声乳化吸除（PE）联合人工晶体植入术（IOL）治疗白内障的疗效,并分析术后前房渗出的影响因素。方法：回顾性分析我院2018年1月~2021年2月收治的行PE联合IOL治疗的白内障患者406例（482眼）的临床资料,观察其视力变化情况及术后并发症发生情况。通过单因素及多因素Logistic回归分析术后前房渗出的影响因素。结果：白内障患者术后视力0.6~0.9、≥1.0眼数占比高于术前（P<0.05）。白内障患者术后发生并发症46眼,分别为晶状体色素沉着、后囊浑浊、角膜水肿各3眼,纤维性渗出膜2眼,术后前房渗出35眼,并发症发生率为9.54%（46/482）。单因素分析结果显示：PE联合IOL术后前房渗出与高血压病史、高度近视、合并青光眼、术前眼内压＞21 mmHg、术中晶状体后囊膜破裂、葡萄膜炎、术中瞳孔直径<3 mm、晶状体核分级≥IV级有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：术前眼内压＞21 mmHg、合并青光眼、高度近视、术中晶状体后囊膜破裂、葡萄膜炎、晶状体核分级≥IV级是术后前房渗出的影响因素（P<0.05）。结论：PE联合IOL治疗白内障,疗效较好,可有效改善患者视力,且并发症发生率较低。患者术后前房渗出受多种因素影响,临床工作中应根据相关因素制定干预、治疗措施以降低术后前房渗出风险。     

不同泪道硅胶引流管留置时间对慢性泪囊炎患者视力、生活质量及复发率的影响

目的:探讨不同泪道硅胶引流管留置时间对慢性泪囊炎患者的生活质量、视力及复发率的影响。方法:回顾性选取2018年1月2019年12月期间于我院就诊的慢性泪囊炎患者91例(128眼),根据术后泪道硅胶引流管留置时间分为A、B两组,其中A组泪道硅胶引流管留置时间6周,44例(61眼),B组泪道硅胶引流管留置时间12周,47例(67眼)。对比两组疗效、视力、并发症发生率、主诉溢泪发生率、生活质量及复发率。结果:A组拔管当天的总有效率高于B组(P<0.05),两组拔管后3个月总有效率对比无明显差异(P>0.05)。拔管后6个月两组社会功能、躯体疼痛、精神健康、生理功能、精力、情感职能、生理职能、总体健康维度评分均较术前升高(P<0.05),但两组组间对比未见统计学差异(P>0.05)。两组患者术前、拔管后3个月视力组间及组内比较均未见统计学差异(P>0.05)。两组患者主诉溢泪发生率比较未见统计学差异(P>0.05)。A组并发症发生率、复发率低于B组(P<0.05)。结论:泪道硅胶引流管留置时间的长短对慢性泪囊炎患者疗效、视力、生活质量、主诉溢泪发生率无明显影响,但留置6周者并发症发生率、复发率低于留置12周者,提示临床应视患者具体情况尽量缩短泪道硅胶引流管留置时间。     

妊娠期腹腔注射多氯联苯对大鼠性行为的影响

将50只同期怀孕的大鼠分为5组,在怀孕第7-18d,每天分别给两组大鼠腹腔注射1．00和20．00mg／kg体重2,2’,4,4’-四氯联苯（PCB47）;分别给另两组注射0．25和1．00mg／kg体重3,3’,4,4’-四氯联苯（PCB77）;对照组注射0．10mL芝麻油。幼鼠出生后第70-91d、97-101d测试F1代雌鼠的接近时间（AL）、爬跨后返回时间（MRL）、插入后返回时间（IRL）、射精后不应期（PER）、脊柱前凸系数（LQ）和雄鼠的爬跨频率（MF）、爬跨等待时间（ML）、插入频率（IF）、插入等待时间（IL）、射精等待时间（EL）、射精后不应期（PEI）、插入率等性行为。结果显示,妊娠期腹腔注射PCB47和PCB77显著降低F1代雌鼠的LQ（对照组为84．4％;PCB47组分别为76．0％、67．8％;PCB77组分别为64．4％、53．3％;P〉0．05）,但对雌鼠的AL、MRL、IRL、PER和雄鼠的MF、ML、IF、IL、EL、PEI和插入率无显著影响（P〉0．05）。     

“食品微生物学”与“食品微生物学检验”对接镶嵌式教学方式初探

"食品微生物学"是食品质量与安全专业的基础课,"食品微生物学检验"为后期专业课程,原教学设计为两门相对独立的课程。教学中发现两门课程在理论、实验教学内容上存在重复和交叉,不利于"教"与"学"的深度融合。为了打破两门课程间的壁垒,我们将理论课程内容进行融合与贯通,实现模块式对接;对实验课程进行整合与设计,将课程内容镶嵌为综合性实验。经过3年的教学实践,我们初步构建了跨课程整合-对接镶嵌式教学模式,不仅提高了教学效率,同时增强了学生专业能力培养和综合素质提高,也为其他课程教学改革提供了借鉴。     

多拷贝毕赤酵母重组菌表达GCL摇瓶优化和高密度发酵

目的:构建高效表达白地霉脂肪酶的毕赤酵母重组菌株,并对筛选得到的菌株进行摇瓶发酵条件优化和分批补料高密度发酵工艺研究。方法:将诱导型表达载体pPIC9K-gcl电转化至毕赤酵母GS115。通过橄榄油-罗丹明B平板和摇瓶发酵筛选高脂肪酶活力的重组菌株,运用基于TaqMan探针的实时荧光定量PCR 法确定其拷贝数,并对菌株进行摇瓶发酵条件优化。在此基础上,研究重组菌在3L 发酵罐中的高密度发酵工艺。结果:筛选得到一株具有3 个白地霉脂肪酶基因拷贝的菌株GS115/pPIC9K-gcl 78#,初始酶活力为220 U/ml。当摇瓶发酵条件为甲醇诱导96 h,每24 h甲醇添加量1 %,接种量2 %,培养基初始pH 7.0,500 ml摇瓶装液量50 ml,甲醇诱导温度25℃ 时酶活力达735 U/ml。3L 发酵罐高密度发酵176.5 h,酶活力达到3360 U/ml,总蛋白含量达到4.30 g/L,且发酵过程中细胞活性一直保持在96 % 以上。结论:基因拷贝数与重组菌株的产酶水平呈正相关,摇瓶优化可显著提高重组菌株的产酶能力,为白地霉脂肪酶的工业化生产奠定了技术基础。