X射线对小牛胸腺脱氧核糖核酸的隐藏破坏作用

(1)用X射线照射小牛胸腺DNA溶液,以还原粘度和紫外吸收光谱的变化为指标,证明射线对DNA大分子除有直接显露的降解之外,还可导致对76度保温不稳定性的出现。这反映了结构上隐藏破坏的存在。隐藏破坏与所接受照射的剂量成比例地增加。(2)按Zamenhof法制备的DNA样品储存液中合有“保护物质”。在“保护物质”的存在下,DNA溶液可耐受6×10~4r的照射而无直接显露的降解发生。但隐藏破坏却不可避免,在一定剂量下可以单独地存在,并随剂量之增加而发展,当剂量增加到一定程度时,显露的降解随之出现。(3)“保护物质”是可透析的,它具有抗射线的作用,而不是保全已遭受降解的DNA的大小外形。实验结果表明“保护物质”可能是钙-柠檬酸盐。讨论了钙-柠檬酸盐保护作用的机制。(4)比较隐藏破坏单独存在和与直接显露的降解同时存在的实验结果表明,隐藏破坏的本质包括了:1)主链的单侧打断,2)部分氢键的破坏,3)残余氢键不稳定性的增加。在三者之间有平行的比例关系。主链的打断可能是后二者出现的原因。分子的直接降解可能又是隐藏破坏积累的结果。(5)在“保护物质”存在下照射DNA,为人工制造隐藏破坏,研究DNA的结构与功能提供了一个简便的方法。     

蓖麻蚕核糖体RNA基因在大肠杆菌中的无性繁殖

用pBR322作运载体,构建了含有蓖麻蚕核糖体RNA基因(rDNA)完整重复单位的重组质粒-pAR3。pAR3含有11.1Kb rDNA完整重复单位,包含有pAR1和pAR2所携带的rDNA片段。制作了pAR3和rDNA的限制性内切酶图谱。发现限制酶图谱与郑仲承等报道的一致,而与家蚕的rDNA的图谱不同。     

蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体RNA基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖

利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA基因(rDNA)的部分片段在E.coli中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHⅠ双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md的rDNABamHⅠ片段。并测定了BamHⅠ片段与pBR322连接方向。     

蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体RNA基因片段在大肠杆菌中的无性繁殖

利用质粒pBR322作运载体,获得了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体rRNA 基因(rDNA)的部分片段在E.coli 中的无性繁殖株。酶切图谱分析及Southern 法分子杂交鉴定证明,重组质粒pARI 含有1.95MdrDNA EcoRI-BamHI 双酶切片段;pARⅡ含有2.6Md 的rDNABamHI片段。并测定了BamHI 片段与pBR322连接方向。     

蓖麻蚕核糖体核糖核酸基因上18S、28S和5.8S核糖体核糖核酸基因的定位

蓖麻蚕的核糖体核糖核酸(rRNA)的基因(rDNA)是多拷贝基因,其重复单位成线性方向排列。在每一重复单位中含有18S、28S和5.8S rRNA基因各一个。了解它们的排列状况是认识rDNA结构的基础。本文将无性繁殖的该rDNA用各种限制性内切酶水解后,制成Southern转移膜与放射性同位素标记的18S、28S和5.8S rRNA杂交;又将18S和28S rRNA制成Northern转移膜与放射性同位素标记的rDNA片段杂交,从而排出18S、28S和5.8S rRNA基因在rDNA上面的相对位置。     

蓖麻蚕核糖体核糖核酸基因的限制性内切酶酶切图谱

用Southern转移和分子杂交法研究了蓖麻蚕(Attacus ricini)核糖体核糖核酸(rRNA)的基因(rDNA)的限制性内切酶酶切图谱。发现该rDNA是由分子量大约为7.0×10~6道尔顿的重复单位所组成。PstⅠ可以切出完整的重复单位。EcoRI、BamHI和BgⅢ在重复单位内部都有切口。这与家蚕(Bombyx mori)的rDNA是不同的。     

用S1核酸酶作图法测定蓖麻蚕18S rRNA基因的5′端位置

测定基因5′端位置是研究基因转录调控的一个重要前提。本文将蓖麻蚕18S rRNA基因DNA的5′端用~(32)P标记,然后与18S rRNA杂交,再用S1核酸酶水解掉非杂交区的DNA和RNA。分析放射自显影的结果,测出18S rRNA基因5′端的位置。在18S rRNA基因的BglⅡ_2位点向EcoRⅠ,方向延伸约220bp处,从这一结果,可知道蓖麻蚕rRNA基因的转录方向是5′EcoRⅠ_2→BglⅡ_23′。     

纤维素板微量氨基酸的分离及几种显色方法的比较

氨基酸分析是研究蛋白质化学的最基本的实验技术之一。现在已经普遍地使用离子交换层析、纸层析、纸电泳、薄层层析等方法分离、分析氨基酸。其中自动化的离子交换层析方法分析具有快速、微量和准确等特点,但需要昂贵的仪器设备,在一般实验室里不易办到。纸层析和薄层层析的方法,设备要求简单,操作方便,操作熟练时也可达到定量的要求。也可以用纤维素薄层层析的方法分离分析氨基酸,并已用于尿和血样品以及其他蛋白质中的氨基酸测定。经我们初步摸索,使用一种小型的纤维素板层析,并将茚三酮试剂直接加入展层溶剂中,蛋白质经酸水解后,可得到完全分开的普通