盐地碱蓬液泡膜Ca2+/H+逆转运蛋白SsCAX1 N末端原核表达和多克隆抗体的制备

采用PCR技术,从盐地碱蓬液泡膜Ca2+/H+逆转运蛋白SsCAX1的cDNA中扩增了其N末端亲水区段(1～210 bp),并将其插入到原核表达载体pGEX-6p-3中进行诱导表达.获得分子量约33.5 kDa的可溶性融合蛋白,经纯化后从免疫家兔中得到了SsCAX1的特异性抗体.     

高亲和K+转运载体(HKT)与植物抗盐性

高亲和K^＋转运载体蛋白（HKT）是一类存在于真核生物和原核生物中的阳离子转运载体蛋白家族。根据其功能可分为两类,即K^＋-Na^＋同向转运体和Na^＋选择性转运体,它们在植物抗盐中均有一定的作用。本文就这方面的研究进展作介绍。     

高亲和K+转运载体SsHKT1的抗体制备及表达分析

利用RT-PCR及RACE技术从盐生植物盐地碱蓬(Suaeda salsaL.)根中克隆了高亲和K 转运载体SsH-KT1的基因。以SsHKT1基因的cDNA为模板,扩增了cDNA中的亲水片段(403~612 bp),连接至原核表达载体pGEX-6P-3中并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达了融合蛋白。该蛋白主要以包涵体的形式存在,纯化后免疫新西兰兔,得到了特异性较高的SsHKT1多克隆抗体。利用此抗体进行了W estern b lot分析,表明SsHKT1可能主要存在于质膜上。进一步研究了K 饥饿及盐胁迫条件下SsHKT1蛋白表达量的变化,结果表明K 饥饿及盐胁迫条件下SsHKT1的表达量都明显增加,表明SsHKT1在盐地碱蓬K 吸收特别是高盐条件下K 营养中有重要作用。     

盐地碱蓬液泡膜Ca2^2＋/H^＋逆转运蛋白SsCAX1N末端原核表达和多克隆抗体的制备

采用PCR技术,从盐地碱蓬液泡膜Ca^2＋／H^＋逆转运蛋白SsCAX1的cDNA中扩增了其N末端亲水区段（1—210bp）,并将其插入到原核表达载体pGEX-6p-3中进行诱导表达。获得分子量约33．5kDa的可溶性融合蛋白,经纯化后从免疫家兔中得到了SsCAXl的特异性抗体。     

大数量序列的PCR保守引物设计实践

引物设计前的序列的全面检索,未注释序列的归类,经多序列比对求带有模糊碱基代码标识(IUPAC ambiguity codes)的共有序列,对设计高质量的引物至关重要,是引物设计过程的难点。目前,综合性核酸序列分析软件,单功能应用软件,在解决上述问题时均显不足。应用互联网提供的在线生物应用程序实践了一种多程序组合使用设计大数量序列的保守引物的方法,探讨了实现大数量序列的保守引物设计的一般流程。     

一种安全高效大豆转化筛选体系的建立

以灭草烟作为筛选剂,利用基因枪法建立一种安全高效的大豆遗传转化体系.比较不同筛选剂对大豆胚尖外植体丛生芽诱导数目的影响.与卡那霉素、潮霉素和草胺膦等传统筛选剂相比,以灭草烟作为筛选剂可使丛生芽的数目增加1倍以上.克隆了拟南芥突变体csrl-2中突变的乙酰羟基酸合成酶基因(ahas),以其作为筛选标记基因,构建可利用灭草烟作为筛选剂的植物表达载体.利用基因枪法将该载体转化大豆,获得6棵灭草烟抗性植株,分子检测证明外源ahas基因整合到5棵转基因大豆植株的基因组中.