幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)的高密度发酵生产工艺及抗原过量表达

本文报道了幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)的高密度发酵生产工艺和抗原基因的过量表达研究结果。采用New Biunswick公司发酵罐,主要发酵参数为搅拌速度1000rpm,通气量为18L／min,溶氧为25％,pH6．5,罐压为48．3kPa,温度37℃,发酵时间为20h。菌体浓度为A 6 0 0 nm40以上,K88、K99抗原效价分别达212水平。发酵过程中发现表达的抗原除装配细菌伞毛之外,过量表达的抗原以相当于伞毛中抗原浓度游离存在于溶液中。含双价疫苗基因的表选型质粒的稳定性在发酵20h后保持在70％。本文结果表明利用小型发酵罐(10L发酵液)每次可制备10000支疫苗,完全可以满足对幼畜腹泻基因工程疫苗盼大量需要。     

长叶车前花叶病毒(HRV_(sh))外壳蛋白赖氨酸残基的修饰

我们曾报道长叶车前花叶病毒上海分离株(简称HRVsh)的外壳蛋白有二个赖氨酸残基,在PH8.5无变性剂存在的条件下,完整病毒颗粒表面的赖氨酸残基可与三硝基苯磺酸(TNPS)起反应,反应后的TNP-HRVsh病毒颗粒的感染力丧失达90％以上。 本文又进行了甲基乙亚胺甲酯(MEI)对HRVsh赖氨酸残基的修饰反应,修饰后的MEI-HRVsh病毒颗粒的感染力也同样丧失90％以上。 从三硝基苯磺酸修饰的病毒颗粒(TNP-HRVsh)中分离得到的RNA能与天然的HRVsh的外壳蛋白重建病毒颗粒,并具有感染力,说明修饰过程中核酸并不受影响。 进一步用同位素~(35)S,~(32)P双标记病毒,再以TNPS修饰标记的病毒,得到(~(35)S,~(32)P)-HRVsh及TNP-(~(35)S,~(32)P)-HRVsh。将两者分别接种于系统寄主青菜(Brassica chinensis)的一片叶片,一天后在非接种叶片上都可测得~(35)S,~(32)P的放射计数。其中,(~(35)S,~(32)P)-HRVsh的~(35)S/~(32)P比值降低了,而TNP-(~(35)S,~(32)P)-HRVsh的~(35)S/~(32)P比值保持不变。说明HRVsh外壳蛋白赖氨酸残基的修饰并不影响病毒颗粒进入寄主细胞,以及在寄主细胞间的转移。同位素双标记的结果表明,其感染力丧失的原因可能是由于上述修饰作用阻止了病毒在感染中所必须的脱壳过程。     

以双链核糖核酸为基因组的病毒的研究——Ⅰ.家蚕细胞质多角体病毒的简易纯化及其性质

以双链核糖核酸为基因组的病毒寄主范围很广,如哺乳动物的呼肠病毒,昆虫的细胞质多角体病毒,植物的水稻矮缩病毒,以及某些微生物的病毒,已经发现有十余种之多。研究这类病毒的感染及复制特性在理论上和实际上都具有重要的意义。本文对家蚕细胞质多角体病毒的纯化,提供了一个简易的方法——分子筛凝胶柱层析,其特点是简便,适于大量制备。纯化病毒制剂经紫外光吸收测定、凝胶电泳及电镜观察都表明是均一的。生物感染活力LD_(50)为1.11×10~(-10)克/头。     

长叶车前花叶病毒上海分离株(HRV_(sh))外壳蛋白功能的研究

植物病毒寄主的致病性是由病毒核酸决定的,而由病毒核酸编码的病毒蛋白的功能则是保护病毒核酸不受外界物理及化学因素的破坏作用。至于植物病毒外壳蛋白在感染上是否起作用,是个尚未解决的问题。郁操国等(未发表)曾报道了HRV_(sh)外壳蛋白赖氨酸侧链被三硝基苯磺酸修饰(TNP-HRV_(sh))后,感染力有明显的下降,提出植物病毒外壳蛋白在感染上确有重要作用。本文报道了修饰后的TNP-HRV_(sh)与天然的HRV_(sh)对心叶烟的感染力有干     

从核酸合成抑制剂的研究谈对肿瘤和病毒的防治

伟大的革命导师恩格斯在《反杜林论》中指出:“生命是蛋白体的存在方式,这种存在方式本质上就在于这些蛋白体的化学组成部分的不断的自我更新。”蛋白体是以蛋白质,核酸为主要组成部分的复杂体系。生命现象中的遗传、生长、变异等都与核酸和蛋白质有密切关系。近年来,研究核酸合成不同水平上的选择性抑制剂对防治细菌、噬菌体、霉菌、病毒引起的疾病和对肿瘤的治疗都起了很大作用。     

挥发性N-亚硝胺总量的定量比色测定

对于食物中N-亚硝胺类致癌物质的含量虽可用气相层析——质谱仪方法进行测定,但由于仪器价格昂贵,在一般实验室较难普及。因而,我们研究了食物中挥发性N-亚硝胺总量的定量比色测定。方法包括溶剂抽提、水蒸汽蒸馏、紫外光解释放亚硝酸根进而用离子交换树脂浓缩、洗脱、显色定量。总回收率为70～110%。可测至10~(-8)克水平。     

幼畜腹泻双价基因工程疫苗(K88、K99)抗原蛋白的生产工艺

本文报道了在幼畜腹泻双价基因工程菌(K88、K99)的高密度发酵和抗原蛋白基因过量表达的研究基础上生产抗原蛋白疫苗的工艺。高密度发酵的工程菌(K88、K99)发酵液经65℃保温处理、离心除去菌体,清液部分含发酵液中抗原量的80％,加聚乙二醇(至最终浓度为7％)沉淀可回收全部抗原蛋白,加消毒的生理盐水溶解及稀释后分装冻干制成抗原蛋白疫苗。疫苗的组成份主要有分子量为52、36、22、18kd的蛋白。此法制备的双价疫苗不经甲醛处理,保持了抗原蛋白的天然空间结构,因此用其免疫怀孕的母猪、分娩后母猪乳汁中含有较高效价的抗体、能中和肠毒素大肠杆苗,有效地保护了仔猪黄痢的危害。     

核酸降解物在水稻生产上的应用及其作用机理的研究——Ⅱ.水稻苗期应用的生理作用

水稻苗期于插秧前1～3天,喷施核酸降解产物,同位素示踪研究表明,插秧后促进了光合产物向根部的输送,移栽后当天增加一倍以上,至移栽后第14天仍比对照增加14%,并促进了根部的磷酸化。核酸降解产物的喷施,移栽后对磷肥,钾肥的吸收能力都比对照有显著的增加,同时也提高了水稻地上部分的光合作用强度。核酸降解产物并有维持叶片活力的作用。这些为水稻插秧后促进其活棵返青快,早发增蘖,增穗而增产提供了生理条件。     

变构酶与代谢的调节控制

一、酶的不同调节控制水平酶是生物体合成的具有催化功能的高分子化合物,它的特点是在体温条件下,催化效能高,并且具有高度的专一性。生物体的新陈代谢都是在各种酶的催化下进行的,所以酶在代谢系统中起着重要的作用。生物体的新陈代谢不是无秩序地进行,而是有规则的在     

核酸降解物在水稻生产上的应用及其作用机理的研究——Ⅲ.水稻对~(14)碳-核酸降解产物的吸收和运转

用~(14)碳标记的核酸降解产物,~(14)碳-核苷酸、~(14)碳-尿嘧啶核苷和~(14)碳-腺嘌呤,研究了水稻秧苗对核酸降解产物的吸收和运转。水稻秧苗叶面和根部都能吸收这些~(14)碳标记的核酸降解产物,其中叶面对~(14)碳-核苷酸的吸收,在6小时后除去所涂叶片外其他部分吸收达70～80%左右,因此在实际应用核酸降解产物中,如喷施6小时内降雨,需要补喷以发挥其应有的效果。