猪干扰素-γ基因在毕赤酵母中的分泌表达

将去除信号肽的猪干扰素-γ（PoIFN-γ）基因置于酿酒酵母α因子分泌信号的DNA序列后, 构建成pPIC9K-α-PoIFN-γ分泌型重组表达载体, 电转化导入毕赤酵母GS115中,经G418筛选后获得2株多拷贝插入的重组子。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出17kD和23kD左右的PoIFN-γ特异蛋白,其表达量为108mg/L,占培养液总蛋白的60%。实验首次在毕赤酵母表达系统中实现了PoIFN-γ基因的分泌表达。     

TAK1siRNA对C2C12细胞内TAK1基因表达的影响

目的:高效下调TAK1基因表达的小干扰RNA(siRNA)分子的获得.方法:采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#94455、siRNA ID # 94549、siRNA ID # 189006)人工合成的TAK1基因特异的小干扰RNA(siRNA)分子分别导入小鼠成肌细胞C2C12中,采用实时荧光定量PCR方法分析细胞内TAK1基因的相对表达.结果:和对照组相比,siRNA ID # 94455、siRNA ID # 94549和siRNA ID # 189006分别下调了细胞内TAK1基因的mRNA表达水平33.34%、46.73%和79.97%.结论:实验获得了能够高效下调TAK1基因表达的siRNA.     

猪微注射基因胚胎的自体移植

冲取７头超排或自然发情配种的湖北白猪后备母猪１-４细胞期胚胎８６枚,显微注射ＯＭＴ／ＰＧＨ基因后,移植回原供体母猪的输卵管内。其中５头受孕,４头维持到分娩,产仔１１头,产仔率１２。８％（１１／８６）;经分子杂交检测,３头阳性,基因整合率２７。３％（３／１１）。转基因效率３。５％（３／８６）。     

RNA-蛋白质印迹筛选HBsAg转录后调节因子表达克隆

RNA结合蛋白是基因表达的重要调节因子.RNA-蛋白质印迹（Northwestern blot）是近年来国外建立的筛选这类因子的重要方法之一.应用这一方法从肝细胞株HepG2 cDNA文库中成功筛选到乙型肝炎病毒表面抗原转录后调节片段互相作用蛋白表达克隆.结果显示：该蛋白与探针结合特异性强,经三轮筛选后,100%克隆为阳性克隆;PCR和EcoRⅠ酶切初步鉴定, 编码该蛋白的cDNA长约1 kb.     

肌生成抑制素及其信号转导

肌生成抑制素(myostatin),也称生长分化因子-8(growth differentiation factor-8,GDF-8),属转化生长因子B(transforming growth factor β,TGF-β)超家族的一员,是骨骼肌生长发育的负调控因子.本文介绍了myostatin的发现及保守性、myostatin的结构特征及加工成熟,重点综述了myostatin的生物学功能及其信号转导的最新研究进展.     

家兔精子膜蛋白rSP10在大肠杆菌中的高效表达及其抗血清的制备

为研究家兔精子膜蛋白rSP10在精子膜上的定位及其免疫原性,将不含编码信号肽序列的rsp10基因插入表达载体pET30a中,N端具有His6肽的融合蛋白re-rSP10得到高效表达,表达产物达细菌总蛋白的67%。经DEAE柱层析纯化表达产物,re-rSP10,产量约为50mg/mL培养物。Western实验结果表明,精子膜蛋白多克隆抗体能识别re-rsp10,说明大肠杆菌表达的re-rSP10具有免疫原性。用纯化的re-rSP10免疫雌性兔,得到re-rSP10专一性多克隆抗血清。将re-rSP10专一性多克隆抗血清加入获能精子中,发现SP10专一性多克隆抗血清严重影响获能精子的运动并且表现为剂量依赖性,但获能精子凝集现象并不明显。     

Arg缓解MSTN对猪肌肉间充质干细胞成脂-分化的抑制

间充质干细胞可分化为脂肪细胞并沉积脂质,从而增加动物脂肪沉积.因此,猪肌肉间充质干细胞被认为是肌内脂肪的重要来源之一.本研究主要在体外探讨了肌肉生长抑制素（MSTN）对猪肌肉来源间充质干细胞成脂分化的影响及Arg的调控作用.结果表明,外源添加MSTN活性蛋白极显著地降低了胞内甘油三酯水平,而添加Arg或MSTN抗体则表现相反的作用（P〈0.01）.同时添加Arg可缓解MSTN对间充质干细胞脂质沉积的抑制作用（P〈0.01）.生脂转录因子表达模式分析表明,外源添加MSTN抑制了细胞PPARγ2和aP2的表达,添加Arg和MSTN抗体增强了细胞ADD1的表达（P〈0.01）.此外,同时添加MSTN蛋白和Arg较仅添加MSTN蛋白极显著增强了细胞ADD1和PPARδ的表达（P〈0.01）,同时添加MSTN和Arg抗体较仅添加MSTN抗体显著增强了细胞ADD1,PPARδ,C/EBPα,PPARγ2和LPL的表达（P〈0.05）.由此可见,MSTN抑制了猪肌肉来源间充质干细胞成脂分化,添加Arg至少部分地通过上调ADD1和PPARδ的表达来缓解MSTN对成脂分化的抑制作用.     

肌生成抑制素及其信号转导

肌生成抑制素（myostatin）,也称生长分化因子-8（growth differentiation factor-8,GDF-8）,属转化生长因子β（transforming growth factor β,TGF-β）超家族的一员,是骨骼肌生长发育的负调控因子。本文介绍了myostatin的发现及保守性、myostatin的结构特征及加工成熟,重点综述了myostatin的生物学功能及其信号转导的最新研究进展。     

苏木、紫草等五种中草药抗氧化活性的研究

苏木和紫草的乙酸乙酯提取物有很强的抗氧化活性,知母、七叶一枝花、桃仁等的该种提取物抗氧化效果则较差。维生素C、酒石酸具有一定的协同增效作用。     

siRNA介导的MKK4表达抑制研究

采用脂质体转染方法,将3对(siRNA ID#64447、siRNA ID#64539和siRNA ID#186583)人工合成的MKK4基因特异的小分子干扰RNA(siRNA)分别导入小鼠成肌细胞C2C12中.实时荧光定量PCR结果表明,转染了siRNA ID#64447的细胞,其MKK4 mRNA的表达水平下调得最多,约为85%.试验获得了能够高效下调MKK4基因表达的siRNA.