微生物工程实验教学中培养学生综合素质的实践

介绍在微生物工程学实验过程中,采取多种手段,积极培养学生理论联系实际能力、独立性、自主性、创造性、责任心和团队合作精神等,为培养和提高学生综合素质和创新能力所做的一些改革与工作尝试。     

坛紫菜（Porphyra Haitanensis）中抑菌活性肽的制备与初步纯化

目的:提取坛紫菜中水溶性蛋白,并对其进行初步纯化和抑菌活性影响因素研究。方法:坛紫菜水溶性蛋白胃蛋白酶在37℃、pH1.8条件下酶解3h,再经超滤、Bio-Gel P-10和DEAE Sephadex A-50层析纯化步骤得到一定分子量范围的多肽混合物。采用平板打孔法和对金黄色葡萄球菌的抑制作用,跟踪测定活性多肽纯化过程及其活性影响因素。结果:SDS-PAGE测定结果表明该抗菌多肽分子量介于43.0KD~66.2KD之间。它对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用随着温度的升高逐渐减弱,5%EDTA、5%柠檬酸、5%维生素C及25%二甲基亚砜对它的抑菌活性有协同作用,而5%维生素E则对它的抑菌活性有拮抗作用。结论:从坛子菜水溶性蛋白中初步纯化得到的分子量介于43.0KD~66.2KD的多肽,对金黄色葡萄球菌的生长有明显地抑制作用,并且它的抑菌活性受到温度,部分有机酸和维生素的影响。     

坛紫菜（Porphyra Haitanensis）中抑菌活性肽的制备与初步纯化

目的：提取坛紫菜中水溶性蛋白,并对其进行初步纯化和抑菌活性影响因素研究。方法：坛紫菜水溶性蛋白胃蛋白酶在37℃、pH1.8条件下酶解3h,再经超滤、Bio-Gel P-10和DEAE Sephadex A-50层析纯化步骤得到一定分子量范围的多肽混合物。采用平板打孔法和对金黄色葡萄球菌的抑制作用,跟踪测定活性多肽纯化过程及其活性影响因素。结果：SDS-PAGE测定结果表明该抗菌多肽分子量介于43.0KD~66.2KD之间。它对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用随着温度的升高逐渐减弱,5%EDTA、5%柠檬酸、5%维生素C及25%二甲基亚砜对它的抑菌活性有协同作用,而5%维生素E则对它的抑菌活性有拮抗作用。结论：从坛子菜水溶性蛋白中初步纯化得到的分子量介于43.0KD~66.2KD的多肽,对金黄色葡萄球菌的生长有明显地抑制作用,并且它的抑菌活性受到温度,部分有机酸和维生素的影响。     

出芽短梗霉A5产胞外多糖发酵条件的优化及产物结构鉴定

基于筛选获得能够生产分子量较高且无色素的普鲁兰多糖酵母菌株,对其进行菌株鉴定、产多糖发酵条件优化和多糖产物鉴定,旨在为工业上普鲁兰多糖发酵提供新的菌株来源。以YPD固体培养基为筛选培养基,氯霉素为筛选压力,曲利苯蓝为筛选指示剂;通过形态学,ITS间隔序列分析对筛选出的A5菌株进行鉴定。采用单因子优化A5菌株的最佳发酵条件;利用普鲁兰酶酶解并结合薄层层析法、红外光谱以及凝胶渗透色谱进行结构鉴定和分子量的测定。A5菌株鉴定为出芽短梗霉属,并被命名为出芽短梗霉A5。最优的发酵条件8%(w/v)麦芽糖,1%(w/v)酵母粉,2%(w/v)蛋白胨,0.5%(w/v)K_2HPO_4,0.06%(w/v)(NH_4)_2SO_4,0.03%(w/v)CaCl_2,pH6,7%(v/v)接种量;经过结构鉴定得知:该菌株的胞外产物是普鲁兰多糖,分子量为63.84 kDa。由此获得了一株生产普鲁兰多糖的出芽短梗霉菌株A5,产物无色素且分子量较高。经过初步的发酵条件优化,在最佳发酵条件下发酵培养后,获得普鲁兰多糖的产量为22.9 g/L。综合上述结果可知,菌株A5能够作为工业上生产普鲁兰多糖的重要候选菌株。