结直肠癌中HSP60和HSP27表达的免疫组织化学研究

目的1观察热休克蛋白60和热休克蛋白27在结直肠癌中的表达及意义。方法：收集结直肠癌80例,其中淋巴结转移40例（转移组）,无淋巴结转移40例（无转移组）;另外,在结直肠癌80例中,有结直肠腺瘤（腺瘤组）以及距肿块15cm以上的正常肠粘膜（对照组）各40例。应用免疫组织化学SP法检测组织中蛋白的表达。结果：HSP60的表达主要定位在癌细胞胞浆,在对照组、腺瘤组、非转移组、转移组中的表达阳性率分别为25％、30％、57．5％、90％,组间比较发现,对照组与转移组、腺瘤组与转移组、转移组与非转移组（x^2=10．912,P〈0．001）的HSP60阳性表达率存在统计学差异;而对照组与腺瘤和非转移组间以及腺瘤与非转移组间无统计学差异。HSP27的表达主要定位在癌细胞的胞浆,在对照组、腺瘤组、非转移组、转移组的表达阳性率分别为5％,35％,50％,90％,组间比较发现,对照组分别与无淋巴结转移组、淋巴结转移组;腺瘤组分别与转移组;非转移组与转移组间存在统计学差异,腺瘤与非转移组间无统计学差异。HSP60和HSP27表达间无统计学相关。结论：HSP27表达可能与结直肠癌发生和转移相关。而HSP60的表达可能在结直肠癌转移中具有重要意义。     

Survivin基因RNA干扰对肺癌细胞凋亡及增殖的影响

目的:探讨Survivin表达对肺鳞癌细胞的凋亡和增殖的影响.方法:利用siRNA阻抑人肺鳞癌细胞内survivin基因的表达,用RT-PCR和Western Blotting法分析survivin基因mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,细胞集落形成实验检测细胞增殖.结果:(1)Survivin在肺癌细胞中表达.转染Survivin siRNA可在RNA和蛋白水平阻断其表达;(2)转染Survivin siRNA的肺癌细胞凋亡率显著增加;(3)转染Survivin siRNA的肺癌细胞的集落形成率显著降低.结论:阻断Survivin表达可通过增加细胞凋亡率和降低细胞增殖增加肺鳞癌细胞的放疗敏感性.     

青年乳腺癌患者P53的表达与临床病理特征的相关性分析

目的:探讨青年乳腺癌患者p53的表达与临床病理特征的相关性分析。方法:选取我院收治小于35岁乳腺癌患者35例为实验组,另选取35岁以上乳腺癌患者为对照组。比较两组患者病理组织分级、淋巴结转移数目以及P53的阳性表达率。结果:实验组P53阳性率为82.86%,高于对照组(65.71%),P0.05;P53阳性率随病理分级、淋巴结转移的增加而增高,经统计学分析呈正相关,P0.05。结论:青年乳腺癌患者的P53表达与病理组织学分级及淋巴结转移呈正相关,故p53的表达有助于判定青年乳腺癌患者的预后。     

左侧大肠癌和右侧大肠癌蛋白质差异表达谱的建立及质谱分析

目的:初步探索左侧大肠癌和右侧大肠癌中蛋白质表达的差异,为左右侧大肠癌生物学特性上的差别提供功能基因组学上的依据。方法:以左右侧大肠癌组织为研究对象,提取组织总蛋白,依次进行二维凝胶电泳,凝胶图象分析,质谱及生物信息学分析。结果:成功建立了左侧大肠癌和右侧大肠癌的二维电泳图谱,进行质谱和生物信息学分析比较得到左侧大肠癌与右侧大肠癌的差异表达蛋白共有16个,其中左侧大肠癌中表达增加的蛋白有10个包括蛋白质二硫化异构酶A1,78 kDa葡萄糖调节蛋白,抑制素,热休克蛋白60,含硫氧还蛋白域的蛋白5,T-复合蛋白1ε亚单位,应急蛋白70,异柠檬酸脱氢酶,蛋白质二硫化异构酶A3,巨噬细胞加帽蛋白;左侧大肠癌表达降低的蛋白6个包括ATP合成酶β亚单位,延伸因子1-delta,热休克蛋白β1,载脂蛋白A-Ⅰ,转甲状腺素蛋白,热休克蛋白β6。结论:左侧大肠癌和右侧大肠癌中存在差异表达蛋白,这些差异表达蛋白可能是左右侧大肠癌生物学性质差异的分子遗传学基础。     

去黑色素法在免疫组织化学中的应用

在有色素的黑色素瘤免疫组织化学鉴别诊断和研究中 ,常遇到的问题是经免疫组织化学 DAB显色后的切片 ,其棕黄色结果是抗原表达还是黑色素的沉集很难区别 ,有必要除去黑色素 ,否则将导致错误的结论。选择什么样的去黑色素方法 ,去色素后对免疫组织化学有无影响以及是否需要进行抗原修复等问题有待摸索 ,为此 ,我们特对 15例有色素和 13例无色素性黑色素瘤进行了实验比较 ,现报道如下 :材料和方法1　材料 :选取我科病理诊断为黑色素瘤的病例 2 8例 ,其中有色素的 15例 ,无色素的 13例 ,常规 10 %福尔马林固定 ,石蜡包埋切片 ,切片厚 4um,共 …     

乳腺癌中EGFR蛋白表达和基因扩增的检测结果比较

目的：比较免疫组织化学技术检测乳腺癌中EGFR蛋白表达和荧光原位杂交检测EGFR基因扩增的结果的符合率,为EGFR靶向治疗病例的选择提供依据。方法：随机选取2005年1月到2011年12月冷水江市人民医院和湖南省肿瘤医院病理科的147例乳腺癌档案病例,采用免疫组织化学技术检测乳腺癌组织中EGFR蛋白表达,荧光原位杂交检测EGFR的基因扩增,比较两种方法阳性结果的符合率。结果：免疫组化染色结果显示EGFR在原发性和转移性乳腺癌中的阳性表达率分别为85%（105/123）和79%1（9/24）,两组比较无显著差异（P〉0.05）。FISH检测结果显示原发性和转移性乳腺癌中分别有12%（15/123）和8%（2/24）存在EGFR基因扩增,两组比较结果无显著差异（P〉0.05）。所有存在EGFR基因扩增的原发性和转移性乳腺癌的EGFR免疫组织化学结果均为阳性。在原发性和转移性乳腺癌中,免疫组化阳性和基因扩增程度间呈显著正相关（P〈0.05）,但免疫组化结果预测基因扩增的特异性较低。结论：免疫组织化学检测EGFR只能作为EGFR靶向治疗病例选择的初步筛选,进一步进行荧光原位杂交检测EGFR基因扩增是必须的。     

一种手工制作组织芯片技术的应用

组织芯片技术,是近年发展起来的一项以形态学为基础的生物学新技术,在实际工作中,我们在无专用制作芯片仪器的情况下,经多次反复实验找到了一种简单可行的制作组织芯片技术,经实践工作应用,取得了较好的效果,现介绍如下:     

NF-κ B和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和鳞癌中表达的意义

目的：初步探索NF-κB和HIF-1在宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中的表达及临床病理学意义。方法：以宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌病例为研究对象,应用免疫组织化学方法检测NF-κB和HIF-1的表达情况并分析其表达在宫颈癌变中的意义。结果：NF-κB在正常宫颈上皮、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌的阳性表达率分别为16%,36%,44%,68%,72%。总体比较存在显著性差异x2=21.636,p〈0.01。组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ和鳞癌有显著性差异。HIF-1α在正常宫颈上皮、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、鳞癌的阳性表达率分别为12%,20%,40%,68%,76%。总体比较存在显著性差异x2=32.733,p〈0.01。组间两两比较显示正常上皮与CINⅢ（x2=16.333 p〈0.001）和鳞癌（x2=20.779 p〈0.001）有显著性差异。结论：NF-κB和HIF-1与宫颈鳞癌的发生有关,可能作为早期诊断的标志物。     

左半结肠癌和右半结肠癌基因差异表达谱的建立

目的:初步探索左半结肠癌和右半结肠癌中基因表达的差异,为左右半结肠癌生物学特性上的差别提供分子遗传学依据。方法:以左右半结肠癌组织为研究对象,提取组织总RNA,依次进行样品RNA进行荧光标记,杂交和清洗,芯片扫描和芯片图像的采集和数据分析。结果:成功建立了左半结肠癌,左半结肠癌旁,右半结肠癌,右半结肠癌旁的基因表达谱,应用SAM软件分析比较得到左半结肠癌与右半结肠癌的差异基因共有11个,包括乳酸脱氢酶B链,泛素D,磷脂酰-4-3磷酸激酶C2-α,FAT,双特异性蛋白磷酸酶2,细胞周期蛋白依赖性激酶4抑制剂D,酪蛋白激酶-1结合蛋白,突触结合蛋白-13,锌指蛋白560,公认未定性蛋白,IgGFc结合蛋白。左半结肠癌旁与右半结肠癌旁的差异基因共有4个,包括金属蛋白酶7,早期生长反应蛋白1,左半结肠癌旁组织中下调的基因包括突触孔蛋白,膜相关磷脂酶A2基因。结论:左半结肠癌和右半结肠癌以及相应癌旁组织中存在差异表达基因,这些基因表达的差异可能是左右半结肠癌生物学性质差异的分子遗传学基础。     

应用蛋白质组学技术筛选宫颈癌临床分期相关蛋白

目的：通过比较早期宫颈癌和中一晚期宫颈癌的差异表达蛋白,以发现与宫颈癌临床分期相关蛋白,为临床预后和复发的预测提供新指标。方法：收集早期宫颈癌和中一晚期宫颈癌组织标本,提取组织总蛋白进行二维凝胶电泳,选择部分差异表达蛋白进行MALDI—TOF质谱分析和生物信息学分析进行蛋白质鉴定,进一步应用WestemBlot和免疫组织化学技术检测部分差异表达蛋白的表达情况。结果：建立了早期宫颈癌组和中一晚期宫颈癌组的二维凝胶电泳图谱,其中两组的平均蛋白质点数分别为1098±23、1142±21,通过进行质谱分析和生物信息学查询,与早期宫颈癌组比较,鉴定了在中一晚期组下调的蛋白4个。包括HemoglobinsubunitbetaHB、caspase-14、galectin-7、CK19;中-晚期组上调的蛋白8个,包括NMP238、HSP70、Calmodulin-like5、S100A9。WesternBlot和免疫组化检测结果均显示S100A9在中-晚期组中的表达高于早期组,CK19在早期组中的表达高于中-晚期组。结论：早期宫颈癌和中-晚期宫颈癌中存在着差异表达蛋白,这些蛋白可能成为宫颈癌预后和复发预测的生物标志物。