不同地区舟山种和孟加拉种眼镜蛇的神经毒素

先前的工作发现 ,眼镜蛇孟加拉种的神经毒分布存在明显的地理差异 ,但是导致这种现象的原因还不是很清楚。该工作首先采集夏季的眼镜蛇种 ,进行分类学的鉴定 ,以排除因为种属分类、季节和年龄而导致的不确定因素对蛇毒成分产生影响。再从鉴定好的成年浙江舟山种和云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒中分离获得短链神经毒素 ;同时采用RT PCR方法得到相应的基因。结果从浙江舟山种眼镜蛇蛇毒中分离到两个神经毒素 ;从云南孟加拉种蛇毒中得到三个神经毒素。这些神经毒素都是短链神经毒素。说明该两个蛇种与已经报道的台湾及浙江的舟山种眼镜蛇很相似 ,蛇毒中都以短链神经毒素为主。另外泰国孟加拉种眼镜蛇蛇毒中则以长链神经毒素为主。这种现象很难用种群发生的前后或者地理距离的长短来解释 ,而可能与地区间的气候、地理环境或者眼镜蛇的食物差别相关。实验统计表明在云南、浙江和台湾这些条件基本相似 ,而泰国就有很大的不同。     

菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的分离纯化和理化性质

以前从菜花烙铁头蛇毒中分离纯化到Jerdonitin。与其他Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶相比,Jerdonitin由金属蛋白酶和去整合素两个结构域组成。但没有检测到其出血和纤维蛋白原降解活性,推测可能高压液相色谱的有机溶液影响了其酶活性。采用不含高压液相色谱柱层析的新分离手段分离得到Jerdonitin。Jerdonitin在还原和非还原SDS—PAGE电泳中分别呈现一条表观分子量为38和36kDa的条带。像其他典型的蛇毒金属蛋白酶一样,Jerdonitin优先降解人纤维蛋白原的alpha链,并且该活性能被EDTA完全抑制,而PMSF对其没有影响。Jerdonitin不诱导小白鼠皮下出血。     

圆斑蝰蛇毒七个C-型凝集素样蛋白亚基的cDNA克隆与序列分析

按照Promega公司的mRNA提取试剂盒操作手册,从圆斑蝰蛇（Daboia russellii siamensis）的毒腺中提取mRNA;利用RT-PCR的方法进行体外扩增,获得C-型凝集素蛋白的基因,克隆到pMD18-T载体中。随机挑选14个阳性克隆进行核酸测序,获得7个编码不同蛇毒C-型凝集素样蛋白亚基的cDNA,分别命名为DRS-L1、DRS-L2、DRS-L3、DRS-L4、DRS-L5、DRS-L6和DRS-L7。由基因序列推导出的氨基酸序列表明,克隆到的7个蛇毒C-型凝集素样蛋白的亚基中均有糖识别结构域存在。BLAST分析显示,仅有DRS-L1的蛋白序列与目前已知的蛇毒C-型凝集素样蛋白的α亚基相似。序列同源性比较并结合半胱氨酸位点分析,推测DRS-L1和DRS—L2可能分别是圆斑蝰蛇毒X因子激活剂的轻链LC2和LC1。DRS-L3和DRS-L4可能是高分子量的蛇毒C-型凝集素样蛋白的β亚基,而DRS-L5和DRS-L6可能是低分子量的蛇毒C-型凝集素样蛋白的β亚基。DRS—L7可能是类似于血小板膜糖蛋白Ib结合蛋白的β亚基。     

两个菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶去整合素基因的克隆与序列分析(英文)

从菜花烙铁头蛇的毒腺中 ,利用RT PCR进行体外扩增 ,克隆到 2个金属蛋白酶 去整合素基因 ,命名为TJM 1、TJM 2 .TJM 1cDNA全长为 15 2 8bp ,编码 4 81个氨基酸 ;TJM 2cDNA全长为 15 78bp ,编码 4 84个氨基酸 .TJM 1和TJM 2都属于Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 ,由信号肽、前肽、金属蛋白酶、间隔肽和去整合素 5部分组成 .Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,它可进一步分为两类 ,一类包括大多数Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 (其中含有TJM 1) ,而TJM 2和agkistin则组成了另一类 .并且TJM 2和agkistin的第 4 0 7位和第 4 2 6位残基都是半胱氨酸 ,而在其它Ⅱ型金属蛋白酶的相应位置 ,4 0 7位是丝氨酸 ,4 2 6位则缺失 .TJM 2和agkistin均有可与整合素α2 Ⅰ区域特异性结合的片段Q NRKRHDNAQ(残基 2 76～ 2 84 ) ,这个片段在其它Ⅱ型金属蛋白酶中并没有发现 .因此推断 ,TJM 2和agkistin可能属于一类新型的Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶 .