重组人睾丸精子结合蛋白对人精子蛋白激酶A及蛋白激酶C活性的影响

为探讨人睾丸精子结合蛋白(human testis sperm binding protein,hTSBP)促进人精子获能的分子机制,检测了重组hTSBP对人精子蛋白激酶A(PICA)和蛋白激酶C(PKC)活性的影响.用重组载体pcDNA3.1/myc-His(-)B-tsbp转染真核细胞后,金属亲和层析纯化表达的重组蛋白质His6-TSBP;重组蛋白质处理健康成人精子后,分别提取精子胞浆及胞膜蛋白组分,发现重组蛋白质可以与精子胞膜结合;经放射自显影检测,发现0.1 mg/ml重组蛋白质可以提高人精子中PKA的活性,对精子膜PKC活性无显著影响.     

泛素活化酶Ube1活性中心疏水区关键苯丙氨酸位点的丙氨酸突变对泛素传递活性的影响

泛素化系统调节真核细胞中几乎所有的生命活动,参与细胞内绝大多数蛋白质的降解,而疾病的发生往往伴随着相关蛋白质的异常。研究与疾病相关蛋白质的泛素化途径,通过该途径促进或抑制其活性对疾病的研究和治疗具有重大的意义。然而,细胞内的泛素传递网络错综复杂,天然条件下很难确认某一特定蛋白质的泛素化途径。我们前期工作建立的正交泛素传递途径中的泛素和泛素化酶含有特殊的突变,是鉴定某一特定E3下游蛋白质底物的有效手段。但E1与E2结合位点的突变设计仍有待完善。本研究重新审视了E1-E2的相互作用,着眼于泛素活化酶Ube1活性中心内的疏水区,突变了该区上3个关键的苯丙氨酸残基为丙氨酸,即F637A、F729A、F741A,并设置合理的实验对照来探究此突变对泛素从E1向E2传递活性的影响。结果表明,突变体m Ube1较好地阻断了与UbcH7的识别及Ub的传递,提示本研究涉及的3个关键苯丙氨酸位点对E1-E2互相识别的重要性,及其作为新的正交泛素传递途径中E1突变位点的合理性。     

不同激素处理对白桦幼树萌条及三萜合成的影响

探索一种可持续、稳定的获得白桦（Betula platyphylla Suk.）枝条的方法,拟通过促萌处理建立多枝条类型白桦材料。以一年生白桦幼苗为试材,采用3个截干高度：10、20、30 cm处理后,每个截干高度使用4种激素或化学药剂处理（20 mg·L^-1 2,4-D、20 mg·L^-1 KT、20 mg·L^-1 6-BA和20 mg·L^-1 KMnO₄）进行促发萌条试验。结果表明,白桦幼苗初次截干（30 d后）采条,截干高度10 cm进行激素KT、6-BA处理的白桦苗萌芽率最高,达65.0%以上;锯末保湿处理下3种截干高度萌条率、萌条产量均较高,萌条率达75.0%以上。枝条中总三萜含量以截干高度20 cm处理下最高,达76.43 mg·g^-1,其次为截干高度10 cm处理下,其他处理均不利于总三萜积累。叶中总三萜含量以截干高度30 cm下激素6-BA处理最高,达91.16 mg·g^-1,是锯末处理（30 cm）的2.68倍。在锯末处理、KT和KMnO₄处理下的枝条和叶片中总三萜含量显著低于其他处理。6-BA对枝条、叶片中齐墩果酸的积累有利,其他处理均不利于齐墩果酸积累。锯末处理有利于二次萌条及产量的提高,截干高度为10 cm处理下萌条产量达126.96 g。枝条总三萜含量以截干高度20 cm进行激素6-BA处理效果较好,达97.99 mg·g^-1。叶中总三萜含量以截干高度30 cm进行激素KT处理最佳,达99.22 mg·g^-1,其次为锯末处理组和6-BA处理组。该研究结果为可持续、高效的利用白桦资源及获得三萜产物提供了技术支持。