大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶（ＮＳＥ）的ｃＤＮＡ,将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基醚的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒,并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序,有两外单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变。同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。     

大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析

用ＲＴ－ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑神经元特异性烯醇化酶的ｃＤＮＡ,将此包括编码全长ＮＳＥ４３３个氨基酸的ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒,并用ＰＣＲ方法测定了全部顺序,经重复实验,发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠与Ｆｏｒｓｓ－Ｐｅｔｔｅｒ报导的ＳＤ大鼠ＮＳＥ基因顺序,有两处单碱基的差别,其中一个涉及氨基酸的改变,同时还对ＲＮＡ的提取及长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。     

大鼠脑α_1型甲状腺激素受体基因的cDNA克隆及序列分析

使用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑α_１型甲状腺激素受体的ｃＤＮＡ,得到包含起始及终止密码子共１２３３ｂｐ、编码４０９个氨基酸的受体全长编码序列．酶切分析后,将此特异ＤＮＡ片段重组入质粒ｐＵＣ系统,得重组质粒ｐＴＲＡ．双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序,结果与文献报导的ＳＤ大鼠的结果一致,同时对长片段ＤＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ扩增进行了方法学的探讨。     

RT-PCR法扩增的人溶菌酶cDNA的克隆及其核苷酸顺序分析

本文以人胎盘全RNA为底物进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),制备出了人溶菌酶的cDNA片段。在限制性内切酶Sma Ⅰ存在的连接体系内,将此cDNA克隆入载体pUC12的Sma Ⅰ位点。用重组质粒双链DNA的末端终止法测定了其全部的核苷酸顺序,证明其全长为444bp,编码了18个氨基酸的信号肽和130个氨基酸的成熟蛋白组成的溶菌酶的前体蛋白,并证明已成功地在此cDNA的3′末端导入了两个终止密码子及一个限制性内切酶Sal Ⅰ的识别位点。由中国人溶菌酶cDNA推导出的氨基酸顺序与有关报道不同,有5个氨基酸的改变。表达蛋白的研究工作正在进行中。     

大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析

胰岛β－细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶（Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,ＧＡＤ,ＥＣ４．１．１．１５）同源物。以双链ｃＤＮＡ为模板,用ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ＧＡＤ基因的ｃＤＮＡ,将此包括编码５９３个氨基酸的全长ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒并用双脱氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为１７７９ｂｐ．经比较发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑与Ｒｕｓｓｅｌｌ报导的大鼠脑ＧＡＤ基因序列,有一处碱基的差别,但并不涉及氨基酸的改变。同时还对用ＰＣＲ扩增长片段ＤＮＡ进行了方法学上的探讨。     

大鼠脑cDNA文库的构建

采用简单高效的cDNA合成技术制备Wistar大鼠脑cDNA基因文库,以纯化的poly( A)⁺－RNA为模板,含Not I切点的oligo－（dT）15为引物,在反转录酶的作用下,合成第一股单链cDNA;用E.coli RNase H除去模板RNA,并以E.coli DNA聚合酶Ｉ,E.coli DNA连接酶和T4 DNA聚合酶催化合成cDNA第二条链,即成为双链cDNA;此双股cDNA除0．5μg用于插入pSPORT I载体,转入E.coli DH5a,建成cDNA文库外,其余保存在－20℃,以此cDNA为模板,应用PCR方法,先后克隆了谷氨酸脱羧酶（GAD,1800bp）、神经元特异性烯醇化酶（NSE,1340bp）,甲状腺激素受体（T3－receptor,1230bp）、胆囊收缩素（CCK,345bp）的全编码基因．     

大鼠脑α1型甲状腺激素受体基因cDNA克隆及序列分析

使用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑α１型甲状腺激素受体的ｃＤＮＡ,得到包含起始及终止密码子共１２３３ｂｐ、编码４０９个氨基酸的受体全长编码离列,酶切分析后,将此特异ＤＮＡ片段重组入质粒ｐＵＣ系统,得重组质料ｐＴＲＡ。双脱氧末端终止法测定了全部核苷酸顺序。     

大鼠脑谷氨酸脱羧酶基因的cDNA克隆及序列分析

胰岛β－细胞自身抗原蛋白之一是脑中谷氨酸脱羧酶（Ｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄｄｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ,ＧＡＤ,ＥＣ４．１．１．１５）同源物,以双链ｃＤＮＡ为模权,用ＰＣＲ方法快速克隆了Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑ＧＡＤ基因的ｃＤＮＡ将此包括编码５９３个氨基酸的全长ＤＮＡ片段重组入ｐＵＣ质粒并用双脱的氧末端终止法测定了全部序列,证明其全长为１７７９ｂｐ,经比较发现Ｗｉｓｔａｒ大鼠脑与Ｒｕｓｓｅｌｌ报导的大鼠脑Ｇ     

大鼠脑前缩胆素原的cDNA克隆

大鼠脑前缩胆素原的ｃＤＮＡ克隆宋学文,赵崇,邓彤,蔡芳,张镜宇（天津医科大学内分泌研究所,天津３０００７０）缩胆素（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ,ＣＣＫ）是一种脑肠肽激素,它不仅存在于小肠粘膜的分泌细胞,而且分布于中枢和外周神经系统［１,２］;在血...