毛喉萜对人胃癌细胞BGC－823中蛋白激酶C及其亚类的影响

以人胃癌细胞ＢＧＣ－８２３为模型,研究了毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对胃癌细胞中蛋白激酶Ｃ活性及其亚类基因表达的作用,同时也观察了毛喉萜对癌基因ｃ－ｊｕｎ及抑癌基因ｐ５３表达的影响．结果表明,２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ毛喉萜处理ＢＧＣ－８２３细胞７２ｈ,细胞质、膜和细胞核ＰＫＣ活性下降,ＰＫＣ亚类β,γ基因表达被抑制,癌基因ｃ－ｊｕｎ的表达也明显降低,而抑癌基因ｐ５３表达升高,上述变化可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖等生理效应的重要分子事件。     

Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（ＦＳＫ）是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂,实验发现：ＦＳＫ和作为参照的诱导分化剂维甲酸（ＲＡ）单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性,并降低膜ＰＫＣ活性,ＦＳＫ可使表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ３－１,４,５）水平降低至对照组的４４．４％至６７％;ＦＳＫ与ＲＡ合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶（ＡＫＰ）的活性。以上结果表明,ＦＳＫ对成骨样细胞内磷脂酰肌醇信息传递体系有深刻影响,可能与其调节细胞的增殖分化有关。     

毛喉萜抑制人胃癌细胞BGC－823增殖与ras基因表达相关性研究

毛喉萜（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）对人胄癌细胞ＢＧＣ－８２３增殖有明显抑制作用,具药物剂量和作用时间之依赖性。剂量为２×１０~（－５）ｍｏｌ／Ｌ之毛喉萜使胃癌细胞在软琼脂中形成集落的能力显著降低;癌基因ｃ－Ｈａ－ｒａｓ之表达明显被抑制,细胞核中与ｒａｓ基因上游调控区２．５ｋｂ片段结合的三种蛋白结合能力下降。联系到以同样浓度药物处理胃癌细胞７２ｈ,细胞质、膜与细胞核中蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性均下降的现象,可能ＰＫＣ活性下降与Ｈａ－ｒａｓ基因上游片段２．５ｋｂ结合蛋白之结合能力下降存在相关性,ＰＫＣ可能通过影响ＤＮＡ结合蛋白的磷酸化作用,导致了Ｈａ－ｒａｓ基因表达之被阻抑。而ｒａｓ基因表达下降可能是毛喉萜抑制胃癌细胞增殖的一个重要分子事件。     

Forskolin对成骨样细胞蛋白激酶C及三磷酸肌醇的影响

Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（ＦＳＫ）是一种植物二萜类化合物,为腺苷酸环化酶的特异激活剂。实验发现：ＦＳＫ和作为参照的诱导分化剂维甲酸（ＲＡ）单独或联合应用均可升高胞浆蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性,并降低膜ＰＫＣ活性。ＦＳＫ可使表皮生长因子（ＥＧＦ）诱导的细胞内三磷酸（ＩＰ３－１,４,５）水平降低至对照组的４４．４％至６７％;ＦＳＫ与ＲＡ合用可显著降低成骨样细胞特征蛋白碱性磷酸酶（ＡＫＰ）的活性,以上结果表明,     

较长单链DNA在质粒DNA中定位插入

一般重组DNA的方法都是用T_4-DNA连接酶把限制性内切酶处理过的外源DNA片段和载体DNA,连接到一起,但这种方法必须要有合适的内切酶切点,因而使得这种方法的灵活应用受到一的定限制。     

RFP134对UMR106细胞膜脂流动性的影响(英文)

癌细胞具有与正常细胞不同的膜脂流动性,导致细胞对生长因子和癌基因产物反应敏感;引起细胞增殖失控。本实验室从植物中发现一种二萜类活性物质──RFP134,在细胞周期和信号传递等多方面表现出有抑制癌细胞增殖,促进细胞分化的作用。本文以大鼠成骨肉瘤细胞（UMR106）和正常大鼠成骨细胞为模型,研究其对癌细胞膜脂流动性的影响。细胞系UMR106由美国麻省总医院内分泌室赠送。成骨细胞由本实验室分离培养。以不同浓度（20、40、60、80、100μM／L）的RFP134,在同一时间处理细胞,或以最适浓度（50μM／L）在不同时间作用于细胞。DPH为荧光标记物,测得的荧光偏振值和微粘度值为膜膜流动性指标。结果显示,无论在恒定的时间、以不同浓度的RFP134作用于UMR106细胞（Fig.1B）,或以恒定的浓度、在不同时间处理UMR106细胞（Fig．1D）,结果均表现为显著降低膜脂流动性。前者,RFP134作用于细胞时,细胞荧光偏振值与微粘度值逐步升高,其变化呈量效关系;而后者,呈时效关系。但在最适浓度与最佳作用时间,荧光偏振值和微粘度值达饱和状态。在同样条件下,RFP134对正常成骨细胞的膜脂流动性影响极小。即：荧光偏振值和微粘度值均在正常范围内保持恒定（Fig．1A;Fig．1C）。RFP134降低癌细胞的膜脂流动性     

RFP134对UMR106细胞膜脂流动性的影响

癌细胞具有与正常细胞不同的膜脂流动性,导致细胞对生长因子和癌基因产物反应敏感,引起细胞增殖失控。本实验室从植物中发现一种二萜类活性物质－RFP134,在细胞周期和信号传递等多方面表现出有抑制癌细胞增殖,促进细胞分化的作用。本文以大鼠成骨肉瘤细胞（UMR106）和下鼠成骨细胞为模型,研究其对癌细胞膜脂流动性的影响。细胞系UMR106由美国麻省总医院内分泌室赠送。成骨细胞由本实验室分离培养。以不同浓度（20、40、60、80、100μM／L）的RFP134,在同一时间处理细胞,或以最适浓度（50μM／L）在不同时间作用于细胞。DH为荧光标记物,测得的荧光偏值和微粘度值为膜膜流动性指标。结果显示,无论在恒定的时间、以不同浓度的RFP134作用于UMR106细胞(Fig.1B）,或以恒定的浓度、在不同时间处理UMR106细胞（Fig.1D）,结果均表现为显著降低膜脂流动性。前者,RFP134作用于细胞时,细胞荧光偏振瑟微粘度值逐步升高,其变化呈量效关系;而后者,呈时效关系。但在最适浓度与最佳作用时间,荧光偏振值和微粘度值达饱和状态。在同样条件下,RFP134对正常成骨细胞的膜脂流动性影响小。即：荧光偏振值和微粘度值均在正常范围内保持恒定（Fig.1A;Fig.1C）RFP134降低癌细胞的膜脂流动性,从而改善了它的细胞膜功能,降低了它对生长因子的反应性,恢复了细胞对调节因子的正常反应。这可能是RFP134能够抑制癌细胞增殖,促进细胞分化的机制之一。