产碱性纤维素酶嗜碱芽孢杆菌AH-8的研究

从贵州、云南、海南、安徽、四川、辽宁等地采集碱性土样,分离筛选到1株能稳定的产生碱性纤维素酶的嗜碱性芽孢杆菌AH-8。研究表明,该菌株最适产酶温度为37℃,最适发酵时间为36 h;采用均匀设计法对其发酵培养基进行优化,优化培养基配方(%):淀粉3.0,胰蛋白胨1.5,牛肉膏1.5,葡萄糖0.3,KH2PO40.1,初始pH 10.0。在优化培养基条件下,其产酶量提高了120%。碱性纤维素酶最适反应温度为60℃;最适反应pH 10.0;0.01%Co2 对酶活力有一定激活作用。     

碱性蛋白酶产生菌的筛选及发酵条件考查

从土壤中分离到的167株芽胞杆菌中选出一株高产、稳产碱性蛋白酶菌株A4－3（嗜碱性枯草芽胞杆菌）。该菌株最适产酶条件为（g／100ml）：蔗糖6．0;豆饼水解液10.0;Na2CO31．0;起始pH9．5。在该条件下,经37℃振荡培养48h,酶活力达2612u／ml。     

报告基因法在生物技术药物活性检测中的应用

随着生物技术药物研发数量的增多,对建立相应生物活性分析方法的需求不断上升。报告基因法作为一种研究基因转录活性和表达水平的工具,由于其快速、灵敏、稳定的特性,越来越多地应用于药物活性检测,包括细胞因子、抗体、激素等各类生物制品。我们就报告基因法在生物技术药物活性测定及药物研发进程中的应用做简要综述。     

鸡α干扰素在毕赤酵母中的表达及糖基化对其表达的影响

目的:实现鸡α干扰素(ChIFNα)在毕赤酵母GS115中的表达,并考察糖基化对其表达的影响。方法:人工合成按照毕赤酵母偏好密码子优化的ChIFNα基因,克隆至分泌表达载体pPIC9,电转到毕赤酵母GS115中进行表达。利用定点突变对ChIFNα基因序列中4个糖基化位点进行缺失,SDS-PAGE分析N-糖基化对毕赤酵母表达ChIFNα的影响。结果:ChIFNα在GS115中获得了表达,在摇瓶发酵条件下,表达量为35.2 mg/L;构建了缺失1~4个糖基化位点的4个突变体,在GS115中实现了表达,分析表达结果显示,与未突变的ChIFNα对照相比,突变体的糖基化程度和表达量都有大幅度下降。结论:N-糖基化对于毕赤酵母表达ChIFNα具有重要影响,无糖基化的ChIFNα在毕赤酵母中表达量极低。     

2种太岁样品中微生物的分离和鉴定

目的：太岁是自然界中一种组成及分类尚不明确的生物体。采用分子生物学方法对2种不同来源地的太岁样品进行菌种分离培养和分子鉴定。方法：太岁表面经75％乙醇消毒处理后,用麦芽汁培养基分离可培养菌株,提取太岁及分离菌株基因组DNA,以之为模板,用16SrDNA、18SrDNA和ITS通用引物进行PCR扩增,扩增片段连入pMD18T载体并测序,通过序列比对对太岁菌种组成进行初步鉴定。结果：从太岁l号样品中分离到假丝酵母（Can-dida）和粘质红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）,从太岁2号样品中分离到根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）和粘质红酵母。结论：2种来源不同的太岁样品中均存在可培养的粘质红酵母。     

发酵法制备硫酸软骨素裂解酶及其酶分离纯化的研究

以温和气单胞菌(Aeromonas sobriaYH311)为出发菌株进行发酵培养,发酵液经硫酸铵沉淀初步分离出粗酶液,将粗酶溶解并透析后再分别经过CM-Cellulose、QAE-sephadex A-50和Sephadex G-150层析柱进行逐级分纯,并跟踪测酶活,最后获得硫酸软骨素酶,经SDS-PAGE检测为一条带。此方法由粗酶至纯酶提纯倍数约186。     

高活力碱性淀粉酶菌种的选育及培养条件研究

通过对产碱性淀粉酶芽胞杆菌Ｂ－９５４５进行紫外线、原生质体亚硝基胍复合诱变等反复处理,获得一株具有较高碱性淀粉酶活力的变异株ＰＮ－６。产酶活力从５４０ｕ／ｍｌ提高到７８０ｕ／ｍｌ,确定的最佳培养条件是：ｐＨ８－１０,３０℃培养４８ｈ。从变异株和出发菌株的生长及产酶曲线看到,变异株的生长速度低于出发菌株,其产酶高峰与出发菌株相比略拖后一段时间,但是酶活力要远大于出发菌株。     

利用固定化酵母细胞生产1，6-二磷酸果糖的研究

目前对1,6-二磷酸果糖(简称FDP)生产基本采用Leisola^[1]等人在1974年提出的以酵母蕾为转化 媒体。以蔗糖、磷酸盐为底物的酶促磷酸化法来进行制备,但在工艺条件上已经有了很大的改进。利用固定化细胞生产FDP是现在人们进行研究的主要方向^[2]。在对常用的几种固定化方法进行比较后．本试验采用聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠为复合载体．对酵母细胞进行包埋,然后在饱和硼酸和CaCl₂溶藏中制成固定化小球。用其制备FDP,转化能力增强,转化周期明显缩短。如果进行工业化生产,可大大高设备利用率．简化工艺条件。     

发酵法制备1,6—二磷酸果糖Ⅰ发酵菌株的确定及反应条件的研究

通过比较6株酵母细胞转化1，6－二磷酸果糖的结果，确定酿造酵母Y162作为转化菌株，对其菌株的培养方法，底物反应额的组成及反应条件进行了详细的考察，在最适条件下：pH6.5，蔗糖8％，NaH2PO45％，MgCl2·6H2O0.1％，甲苯4.0％，氯丙嗪0.2％，反应时间为8-10h，湿菌体与反应液的比例为1：4，反应液中FDP的产量可达12．1mg／ml。