SARS病毒N蛋白的原核重组载体的构建和表达

将SARS病毒N蛋白的基因克隆到原核表达载体 pGEX KG上 ,使其在大肠杆菌DH5α菌株中以与GST蛋白融合的形式表达。采用GluthathionSepharose 4B亲和层析柱对融合蛋白进行纯化 ,并用SDS PAGE和WesternBlot对表达的融合蛋白进行分析鉴定。结果表明 ,本实验成功地构建了高效表达SARS病毒N蛋白的重组表达载体 ,所获得的融合蛋白可以直接用于SARS抗体的检测 ,可用于SARS的早期诊断及SARS疫苗的研究。     

结核分枝杆菌H37Rv刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA分析及鉴定

分析毒性结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)H37Rv刺激RAW264.7巨噬细胞的表达谱芯片以及筛选和鉴定M.tb H37Rv感染巨噬细胞RAW264.7后差异表达的lncRNA。首先,分析热灭活的H37Rv刺激RAW264.7细胞24h后lncRNA表达谱芯片,并对差异表达的lncRNA和mRNA进行生物信息分析,然后采用实时定量聚合酶链反应对16条在芯片中差异表达的lncRNA进行细胞水平验证;进一步在H37Rv感染小鼠的脾脏和肺脏中检测差异表达的lncRNA。结果显示,表达谱芯片中4 730条lncRNA的表达水平上调,9 558条lncRNA的表达水平下调。生物信息分析筛选的16条lncRNA,其染色体定位于附近蛋白质编码基因的基因间区或者与外显子区域有重叠,mRNA功能注释显示差异表达的mRNA主要集中于转录调节、磷酸化、凋亡等生化过程以及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等抗结核的信号通路中。在H37Rv作用下的细胞水平和动物感染模型的组织中RT-q PCR验证出与芯片结果相同的4条lncRNA,其中上调的有3条,下调的有1条。研究中异常表达的lncRNA可为巨噬细胞在结核分枝杆菌感染中的功能紊乱提供线索,为后续的研究奠定基础,进一步的研究将集中于发掘lncRNA在宿主调控中发挥的功能。