血清Hcy与CysC 对早期2型糖尿病肾病的临床诊断价值分析

目的:分析血清同型半胱氨酸(Hcy)与胱抑素C(CysC)对早期2型糖尿病肾病的临床诊断价值。方法:选择2013年5月至2016年5月我院收治的早期糖尿病肾病患者60例为A组,选取同期我院收治的单纯糖尿病患者60例为B组,另选我院同期健康体检者60例为C组,检测三组的血清Hcy、CysC、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿蛋白排泄率(UAER)。结果:与C组比较,A组和B组的BUN、Scr、UAER均升高(P0.05),A组的UAER高于B组(P0.05),但A组的BUN、Scr与B组比较,组间差异无统计学意义(P 0.05)。A组的病程明显高于B组(P0.05)。与C组比较,A组Hcy与CysC水平升高(P0.05),B组的Hcy水平升高(P0.05),CysC水平升高,但差异无统计学意义(P 0.05);与B组比较,A组Hcy与CysC水平升高(P0.05)。A组的Hcy、CysC、Hcy+CysC阳性率均明显高于B组和C组(P0.05),B组Hcy、CysC、Hcy+CysC阳性率均明显高于C组(P0.05);A组和B组的Hcy+CysC联合检测的阳性率高于Hcy、CysC的单独检测阳性率(P0.05)。Hcy与病程、BUN、Scr、UAER均呈正相关,相关系数r=0.650、0.488、0.596、0.761,P0.05,CysC与病程、BUN、Scr、UAER均呈正相关,相关系数r=0.681、0.502、0.601、0.825,P0.05。结论:血清Hcy与CysC可及时、准确的反应2型糖尿病患者的肾损伤情况,从而有利于早期2型糖尿病肾病的及时检出。     

NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移

本课题组先前研究证明NUAK1/ARK5参与乳腺癌、胶质瘤侵袭转移,但机制尚不清楚.本文证明,NUAK1通过影响F-actin聚合促进乳腺癌的侵袭转移.应用小RNA干扰技术敲除乳腺癌细胞系MDA-MB-231中的NUAK1,用G418进行稳定筛选,并用Western印迹进行蛋白质表达检测,结果显示,成功敲除MDA-MB-231细胞中的NUAK1;采用Transwell侵袭实验检测NUAK1在乳腺癌细胞侵袭转移中的作用,结果表明,NUAK1被干扰的SiNUAK1/MDA-231细胞的侵袭能力明显减弱;应用免疫荧光法对细胞的F-actin进行荧光染色,半定量F-actin聚合分析结果显示,IGF-1在转染空载的细胞组（Scr/MDA-231）能诱导肌动蛋白短暂的聚合反应,而在敲除NUAK1的细胞组（SiNUAK1/MDA-231）肌动蛋白的聚合显著减少;用细胞因子IGF-1刺激乳腺癌细胞观察cofilin磷酸化,结果显示,在敲除NUAK1的细胞组（SiNUAK1/MDA-231）,IGF-1诱导的cofilin的磷酸化明显受抑制.上述结果表明,NUAK1能通过促进F-actin的聚合从而影响乳腺癌细胞的侵袭转移.     

基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。     

间质表皮转化因子通过PI3K/AKT/MMPs信号通路促进肺腺癌细胞的侵袭转移

间质表皮转化因子（mesenchymal to epithelial transition factor,MET）在多种癌症中异常表达,影响肿瘤的发生发展,但MET影响肺腺癌的分子机制并不明确。本研究收集3例淋巴结转移的肺腺癌组织（lung adenocarcinoma tissues,LAD）和3例无淋巴结转移的肺腺癌组织,用于微阵列基因芯片分析。结果显示,与无淋巴结转移的肺腺癌组织相比,有淋巴结转移的肺腺癌组织中有1 314条mRNAs表达上调,400条mRNAs表达下调。其中,MET在有淋巴结转移的肺腺癌组织中表达显著升高。随机选取8个差异表达基因,对收集的潍坊医学院附属医院2014年2月至2017年2月间有淋巴结转移的肺腺癌组织和无淋巴结转移的肺腺癌组织各30例通过qRT -PCR实验进行微阵列基因芯片验证。结果显示,所选mRNAs的表达与微阵列结果一致,验证了微阵列基因芯片结果的准确性。通过Western 印迹进一步检测MET的表达。结果显示,相较于正常肺上皮细胞,肺腺癌细胞中MET的表达显著升高。利用质粒转染,敲减肺腺癌细胞A549中的MET,Transwell侵袭实验结果显示,敲减MET后肺腺癌细胞的侵袭能力明显降低;对各细胞组进行EGF（epidermal growth factor）处理并检测PI3K/AKT/MMPs信号通路,Western 印迹检测结果显示,敲减MET后,肺腺癌细胞中基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase 2,MMP-2）和MMP-9的表达显著下降, AKT的磷酸化水平也显著下降。上述结果表明,MET可通过激活PI3K/AKT信号通路进而增加MMPs的表达促进肺腺癌的侵袭转移。     

过表达Snail增强肺癌细胞A549的体外侵袭能力

用锌指转录因子Snail诱导肺癌细胞A549发生上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),检测肺癌发生EMT后细胞侵袭能力的变化,为临床筛选分子靶向药物提供依据.构建pcDNA3.1-snail载体,用pcDNA3.1-snail及空pcDNA3.1载体转染肺癌A549细胞后,进行G418筛选;光镜观察培养后细胞形态学的改变、免疫细胞化学与免疫荧光检测细胞表达E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的改变,Western印迹检测细胞中E-钙黏着蛋白和波形蛋白的改变,Transwell侵袭小室法进行细胞体外侵袭能力检测.采用pcDNA3.1-snail转染细胞后,A549细胞变得细长,细胞融合度降低.免疫细胞化学、免疫荧光、Western印迹结果显示,E-钙黏着蛋白表达降低,波形蛋白表达升高;transwell侵袭小室法结果显示,过表达Snail的A549细胞穿透matrigel胶的细胞数明显增多.结果提示,Snail能有效诱导肺癌发生EMT,并且能增强肺癌的体外侵袭能力.     

血浆miR-29b与急性冠脉综合征患者胞外基质蛋白含量的关系及其诊断价值分析

目的:探究血浆微小RNA-29b(miR-29b)与急性冠脉综合征患者细胞外基质(ECM)蛋白含量的关系及其诊断价值。方法:选择2019年2月至2019年7月我院诊治的80例急性冠脉综合征患者作为观察组,另选择同期我院体检的80例健康志愿者作为对照组。检测两组受试者血浆miR-29b、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)和Ⅰ型前胶原蛋白(PCⅠ)水平,采用Pearson相关性分析血浆miR-29b与HA、LN和PCⅠ水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆miR-29b、HA、LN和PCⅠ对急性冠脉综合征的诊断价值。结果:与对照组相比,观察组的血浆miR-29b水平明显下降(P0.05),而血浆HA、LN和PCⅠ水平明显升高(P0.05)。血浆miR-29b水平与血浆HA、LN和PCⅠ水平均呈负相关关系(P0.05),ROC曲线分析结果显示,血浆miR-29b单独检测的敏感性和特异性分别为79.10%、71.60%,优于ECM三个指标的单独检测,且四项指标联合检测的敏感性和特异性高于单项检测。结论:急性冠脉综合征患者血浆miR-29b水平下调,且与ECM蛋白水平呈负相关,在急性冠脉综合征临床诊断中具有一定的价值。     

GAB2提高体外培养的乳腺癌MCF-7细胞迁移能力

GRB2相关结合蛋白（GRB2-associated binding protein 2,GAB2)是Gabs家族重要成员,在细胞增殖、分化及迁移等过程中发挥重要作用。已有研究证明,GAB2与肿瘤侵袭转移相关,但目前GAB2在乳腺癌细胞侵袭中的研究少见报道。本研究证明,GAB2可提高乳腺癌MCF-7细胞迁移能力。Western印迹结果显示,GAB2蛋白在高转移细胞株MDA-MB-231中高表达|相反,在低转移细胞株MCF-7中低表达。瞬时转染结合Western印迹、酶联免疫吸附实验(ELISA)揭示,过表达GAB2明显增加MMP-2及MMP-9蛋白表达。Transwell检测显示,过表达GAB2明显增强MCF-7细胞的迁移能力。与未转染细胞比较,采用10 ng/mL表皮细胞生长因子(EGF)刺激转染细胞5 min,即可明显增强磷酸化的Akt、ARK5表达。上述结果提示,GAB2可通过参与Akt-ARK5信号通路,增加MMP-2、MMP-9蛋白表达,增强肿瘤细胞的迁移能力,这可能是GAB2促进肿瘤侵袭的部分机制。     

白藜芦醇对高脂胁迫团头鲂抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力的影响

为探讨白藜芦醇（RSV）对高脂胁迫团头鲂特定生长率、抗氧化能力、非特异免疫机能和抗病力的影响,试验设计5组饲料:正常脂组（脂肪水平5%）、高脂组（脂肪水平11%）以及在高脂组中分别添加0.04%、0.36%、1.08% RSV。养殖试验持续10周,在采样结束后,进行嗜水气单胞菌攻毒试验,记录攻毒后96h的成活率。结果表明:团头鲂的特定生长率和日均采食量在添加1.08% RSV组出现最小值,并显著低于其他各组,且团头鲂的饲料效率表现出相似趋势。长期高脂饲喂可导致团头鲂血浆GSH含量显著下降,血浆MDA和NO含量显著升高,形成氧化应激。而长期氧化应激状态,可使团头鲂血浆溶菌酶活性和补体C3含量显著降低,肝脏中HSP70和HSP90应激调控基因表达上调,TNF-α炎症反应基因表达也上调。添加0.04% RSV组显著降低了血浆中SOD活性;添加0.36%和1.08% RSV组显著降低血浆MDA和NO含量,显著抑制了血浆SOD和CAT活性,且添加1.08% RSV组显著增加了鱼体血浆GSH含量。添加0.04%、0.36%和1.08% RSV组均显著提高了团头鲂血浆补体C3含量和溶菌酶活性,显著下调了高脂胁迫团头鲂肝脏中HSP70、HSP90与TNF-α mRNA的表达量。嗜水气单胞菌攻毒后团头鲂的成活率显著受到RSV的影响,并且在1.08% RSV添加组成活率最大。综上结果表明,团头鲂摄食高脂日粮之后,机体处于氧化应激状态,导致鱼体非特异免疫力和抗病力低下。而添加适宜剂量的RSV能够改善机体这种氧化应激的状态,提高鱼体的非特异免疫力和抗病力,其中以1.08%的添加量最优。     

早期康复锻炼对脑外伤患者肢体功能障碍的影响

目的：探讨早期康复锻炼对重型脑外伤患者肢体功能障碍的影响。方法：将62例脑外伤肢体功能障碍患者,随机分为康复护理组（31例）和对照组（31例）。对照组给予神经外科常规治疗和护理;在此基础上,康复护理组采用早期肢体康复锻炼。分别于入选治疗前和治疗后4周、12周进行测评。采用Fugl-meyer评分（FMA）评定运动功能;采用Barthel指数评定日常生活自理能力（ADL）。对比两组FMA和ADL指数。结果：两组患者的Barthel指数和Fugl-meyer评分均有一定程度的改善,康复护理组的改善幅度明显优于对照组（P〈0.01orP〈0.001）。结论：重型脑外伤患者接受早期综合康复护理能明显改善肢体运动功能,提高日常生活活动能力,提高患者的生存质量。     

被动吸烟下调大鼠卵巢雌、孕激素及其受体的表达

目的利用Wistar大鼠烟雾吸入模型,观察被动吸烟对Wistar大鼠卵巢结构的影响,检测生殖激素水平,分析生殖内分泌的变化,为提倡生育期妇女避免被动吸烟提供新的理论依据。方法建立大鼠烟雾吸入模型。32只健康雌性Wistar大鼠,鼠龄(60±5)d,每只体重200～250g,随机分为空白对照组和实验组,每组16只。实验组吸烟3个月,对照组正常饲养。3个月后处死两组大鼠。酶联免疫吸附试验方法 (enzyme linkedimmunosorbent assay,ELISA)检测雌鼠血清中雌激素(estrogen,E2)、孕激素(progesterone,P4)的水平;常规石蜡切片,免疫组织化学SP法检测各组雌鼠卵巢雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)的表达情况。所得数据采用SPSS软件作统计学处理分析,比较各组间差异程度。结果①酶联免疫吸附试验结果 :吸烟3个月大鼠血清E2水平比空白对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性;吸烟3个月大鼠血清P4水平比空白对照组显著降低,其浓度值比较差异有显著性。②免疫组织化学结果 :ER主要表达在大鼠卵巢组织的各级生长卵泡的颗粒细胞的细胞核内,呈棕黄色颗粒状分布,卵泡膜细胞和间质细胞也有少量表达。吸烟3个月的大鼠卵巢组织中ER的表达显著低于空白对照组。PR主要表达在大鼠卵巢组织卵泡的颗粒细胞的细胞质和细胞核中,呈棕黄色颗粒状分布,吸烟3个月的大鼠卵巢组织中PR的表达显著低于空白对照组。结论①成功的建立了大鼠被动吸烟模型。②被动吸烟可使大鼠血清中E2及P4水平明显降低,使大鼠卵巢中ER及PR的表达减少,提示被动吸烟可破坏卵巢的功能,引起生殖内分泌失调。