奶牛HSP70基因表达及其连锁微卫星标记与耐热性状的相关性

为了研究奶牛HSP70基因的mRNA表达规律和其紧密连锁的3个微卫星标记与耐热性状的相关性,文中在日平均温湿度指数(THI)为86.2(高温期)、70.9(临界高温期)和56.8(适温期)时分别采集10头处于同一泌乳阶段的同龄健康奶牛的尾静脉血,采用实时荧光定量RT-PCR技术分析不同条件下奶牛HSP70基因在外周血淋巴细胞的mRNA表达水平。结果表明:随THI升高,HSP70mRNA表达量呈上升趋势,高温期奶牛的外周血淋巴细胞HSP70mRNA表达丰度极显著高于临界高温期和适温期(P0.01),且与奶牛的耐热指标具有一定的遗传相关,表明HSP70基因可以作为奶牛热应激反应的候选基因。选取23号染色体上与HSP70紧密连锁的3个微卫星标记BMS468、BM1258和BM1815,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其在160头荷斯坦奶牛的遗传变异情况,利用最小二乘法拟合线性模型初步探索了这3个微卫星座位与奶牛耐热指标的关系。相关分析表明:耐热系数、红细胞钾含量及高温期日产奶量下降率的最有利基因型在BMS468基因座和BM1815基因座上,分别为134bp/128bp(P0.05)和186bp/148bp(P0.05);BM1258基因座上,最有利基因型101bp/99bp的高温期日产奶量下降率最低(P0.05)。     

中国美利奴(新疆军垦型)绵羊9个微卫星基因座多态性研究

利用PCR技术和复合电泳银染技术检测中国美利奴(新疆军垦型)绵羊第1号染色体上BM6506,BM1824,BM6438, ILSTS004和OarDB6 等5个基因座和第6号染色体上 BM4621,OarHH55,BM143和OarJMP8 等4个基因座,共9个基因座的基因频率（Pi）、个体鉴别力（DP）、杂合度（H）、多态信息含量（PIC）、和非父排除概率（PE）。结果显示：9个微卫星基因座的基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,绵羊中9个微卫星基因座中BM4621 基因座的DP、H、PIC和PE都为最高。9个微卫星基因座的累积个体鉴别力(CDP)为0.99999,累积非父排除能力(CPE)为0.99915。结果显示9个微卫星基因座适用于中国美利奴(新疆军垦型)绵羊的遗传连锁分析、个体识别和亲权鉴定等研究领域。     

牛Pbx-1基因的电子克隆及生物信息学分析

新基因全长cDNA序列很难获得,但电子克隆却提供了基因克隆的一种策略.利用小鼠Pbx-1基因编码序列(NM_183355)为种子序列进行电子克隆获得牛Pbx-1基因完整编码序列.然后,用生物信息学方法分析了牛的Pbx-1基因的结构,密码子偏性和氨基酸的同源性等.结果表明:该基因cDNA全长1 754 bp,无内含子,最大开放阅读框1 305 bp.编码434个氨基酸.预测其编码的蛋白分子量为47 189.5 Da,与小鼠的同源性为81%.     

酪氨酸磷酸化蛋白在体外获能豚鼠精子上的分布与表达

为研究豚鼠精子获能过程中蛋白酪氨酸磷酸化的变化规律,将豚鼠精子悬浮于改良的TALP获能培养基中,在5% CO2 孵箱37 ℃培养,以精子与金霉素(CTC) 荧光结合类型为指标评价精子获能状态,用免疫荧光技术和Western blot方法检测酪氨酸磷酸化的蛋白在精子上的分布以及酪氨酸磷酸化水平的变化。结果显示,随着获能的进行,发生蛋白酪氨酸磷酸化的精子占总精子的百分比增加,由未获能前的36％增至获能7h时的92％。酪氨酸磷酸化的蛋白分布变广,由精子头部扩增至精子头部、鞭毛主段和中段。另外,有80,45,40kDa的三种蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中40kDa的蛋白酪氨酸磷酸化水平自精子体外培养后呈递增趋势,45kDa的蛋白酪氨酸磷酸化自培养3h后发现并呈递增趋势,而80kDa的蛋白酪氨酸磷酸化水平在精子培养3h时最高,后呈递减趋势。     

奶牛乳腺上皮细胞系的建立及高温对细胞超微结构的影响

应用差酶消化法和反复贴壁法在体外建立奶牛乳腺上皮细胞培养方法,以细胞流式术、免疫组化、免疫印迹、超微结构观察等方法对乳腺上皮细胞特性进行检测,并研究高温热刺激对乳腺细胞超微结构的影响。实验结果表明,运用本方法建立的奶牛乳腺细胞系上皮特性及遗传特征完备;41℃ 1h 的高温热刺激可使乳腺细胞染色质浓缩、线粒体肿胀、空泡化,形成凋亡小体,说明高温可以诱发乳腺细胞凋亡。     

生物炭对土壤物理性状及异噁草松消减的影响

采用桶柱和盆栽试验,模拟长残效除草剂土壤残留环境,研究生物炭对土壤物理性状以及异噁草松残留消减的影响。结果表明:土壤中施入水稻秸秆生物炭在2~32 mg·kg-1范围内,容重平均降低0.126 g·cm-3,固相比平均降低21.2%,气相和液相比分别增加29.8%和15.3%,土壤物理性状明显改善;桶柱试验表明,异噁草松主要分布在30 cm以上土层,初始浓度越高,土壤残留量越大;生物炭对土壤中异噁草松的消减有促进作用,随着施炭量的增加,异噁草松土壤残留量降低,对作物的生物有害性降低。     

不同季节荷斯坦牛3个微卫星座位与GSH-Px、SOD和Na+/K+-ATP酶活性及日产奶量的关系

选择分别与谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和Na⁺/K⁺-ATP酶基因紧密连锁的3个微卫星座位BMS2258、SOD1和BM723, 采用PCR及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析其在130头荷斯坦牛中的遗传变异, 计算了3个微卫星座位的多态信息含量、有效等位基因数和遗传杂合度, 并利用最小二乘法拟合线性模型初步探索了它们与荷斯坦牛夏、秋季GSH-Px、SOD、Na⁺/K⁺-ATP酶活性及日产奶量的关系。结果表明, 3个微卫星座位与其紧密连锁基因的酶活性及日产奶量均存在显著相关(P<0.05)。BMS2258座位182 bp/164 bp的GSH-Px活性和日产奶量对应的最小二乘均值较高; SOD1座位148 bp/146 bp对应的SOD活性的最小二乘均值较高, 148 bp/148 bp对应的日产奶量最小二乘均值较高; BMS2258座位161 bp/111 bp对应的Na⁺/K⁺-ATP酶活性和日产奶量的最小二乘均值较高, 它们是各自座位上的最有利基因型。     

高温对乳腺上皮细胞生长及凋亡的影响

近年来随着生物技术的发展,对应激的研究已经深入到细胞水平上,Li met al·(2006)揭示细胞抵抗热应激的能力因细胞种类、热处理的温度、时间的不同而存在差异;热应激还会引起G1/S或G2/M细胞周期调控点的阻滞(Kuhl and Rensing,2002;Fuse et al.,1996),剧烈的热应激还可以诱导细     

牛Irak-1基因的电子克隆及生物信息学分析

电子克隆提供了一种利用基因组数据库克隆新基因全长cDNA序列的策略。利用小鼠Irak-1基因编码序列(NM_008363)为种子序列进行电子克隆获得了牛Irak-1基因完整编码序列。然后,用生物信息学方法分析了该基因的结构,微卫星位点,密码子偏性和氨基酸的同源性等。结果表明:该基因cDNA全长2 645bp,无内含子,最大开放阅读框2 157bp,编码718个氨基酸,与小鼠的同源性为77%。     

牛源HSP70基因点突变、分子进化和pET32a-c(+)原核表达

设计引物PCR方法克隆了奶牛1926bp的HSP70基因,连接到pGEMR○-T Easy Vector上测序,与NCBI上的序列比对,发现开放阅读框内的点突变(941位点,T→C),致使314位L(亮氨酸)→P(脯氨酸)。DNAstar Protean分析点突变对蛋白的原核表达一、二级结构、等电点进行了分析,结果显示螺旋转角区数目增多,不规则卷曲发生轻微变化,但其它指标均不变。此外,通过DNAstar MegAlign用Clustal V方法分析HSP70家族蛋白的同源性、氨基酸残基替换频率并构建了分子进化树,结果发现碱性、酸性氨基酸(R和K)、分支的氨基酸(V和L)、极性氨基酸(S和T)等在生物HSP70分子进化中氨基酸发生替换的频率最高,HSP70可以作为研究生物系统演化的一个重要的工具。在上述基础上,在HSP70基因上、下游引物分别加上EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点,构建了pET-32a-c( )-bHSP70原核表达质粒,IPTG诱导成功得到重组牛源HSP70蛋白,293细胞和Hela细胞的体外实验表明原核表达的蛋白有抗凋亡生物活性[动物学报51(6)1080-1090,2005]。