广东阳春重阳传统药市药用民族植物学研究

该研究自2013年开始对阳春开展了全面的中药资源普查工作,在全面了解阳春地区药用植物资源的基础上,于2013年和2014年两次对阳春重阳传统药市进行全面跟踪调查。结果表明：阳春重阳传统药市出售的药物种类丰富,共收集鉴定得出134种药用植物,隶属于60科117属,并对收集到的药用植物进行编目,包括俗名、学名、药用部位、用途和用法等。从药用植物的科、属分布上来看,其中种类较多的科有大戟科(11种)、蝶形花科(10种)、菊科(10种)、茜草科(9种)、马鞭草科(6种)、姜科(5种)、防己科(5种)。药用植物的种类广泛分布于各科和属中,而非集中于少数科、属内。此外,还对阳春重阳传统药市所形成的文化基础、植物应用特色和药材地域特色进行了分析,在药市中调查到一批具有当地特色的滋补养生类的药材,得出阳春当地具有将药用植物融入日常饮食的习惯。药市中售卖的药材功效与当地的自然环境密切联系,其中尤以治疗与岭南地区湿热的气候和瘴疠虫蛇等特点所引起的常见疾病为主。同时,对阳春药市的可持续发展提出了意见和建议。     

大肠杆菌tyrR基因剔除及其对苯丙氨酸生物合成的影响

TyrR是大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成和运输途径中的一种全局性调控蛋白质。采用双交换同源重组的方法定位突变大肠杆菌染色体tyrR基因 ,在该基因中插入带有卡那霉素抗性基因的DNA片段 ,使之失活 ,实现基因剔除。经PCR、DNA测序、lacZ报告基因等多种方法证实了基因剔除的可靠性。tyrR基因剔除后 ,大肠杆菌芳香族氨基酸生物合成中受TyrR蛋白调控的关键酶的酶活力有所提高 :3 脱氧 2 阿拉伯庚酮糖 7 磷酸合成酶(DAHPS ,由aroG编码 )酶活力提高了 1.0 8倍 ,转氨酶 (AT ,由tyrB编码 )酶活力提高了 2 .70倍 ;突变菌株发酵生产苯丙氨酸的能力提高了 1.5 9倍 ;同时 ,与芳香族氨基酸运输相关的通透酶基因aroP(P)的阻遏被解除 ,细胞运输芳香族氨基酸的能力提高了 70 .2 %。     

纳米混悬药物传递系统研究进展

在新药研发过程中,约有40%的药物存在溶解性差的问题,限制了药物的开发与应用。纳米混悬剂是20世纪末发展起来的一种纳米药物传递系统,可增加难溶性药物的溶解度和溶出速率、改变药物的体内药物动力学特征、提高口服生物利用度、安全性和有效性。纳米混悬剂不但适用于水溶性差的药物,而且适用于水溶性、脂溶性均较差的药物,其制备方法主要包括"bottom up"和"top down"两种。本文从纳米混悬剂的特点、理论基础、专利技术及应用等方面对纳米混悬剂的研究进展进行了综述。纳米混悬剂对改善难溶性药物的溶出、吸收,提高难溶性药物的有效性、安全性等方面具有显著优势,且适合工业化生产,已有越来越多的产品问世。纳米混悬技术是未来药物传递系统的发展方向之一,将具有良好的应用前景。     

骨髓间充质干细胞移植对急性肝功能衰竭大鼠肝组织miRNA-155和TNF-α表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞（BMSCs）移植对急性肝功能衰竭（ALF）大鼠肝组织中miRNA-155和TNF-α表达的影响,以及与BMSCs疗效间的关系。方法将SD大鼠随机分为健康对照组、ALF组、BMSCs治疗组和BMSCs预防组,其中ALF组予以900 mg/kg D-GalN＋10μg/kg脂多糖腹腔注射建立模型;BMSCs治疗组在900 mg/kg D-GalN＋10μg/kg脂多糖腹腔注射后2 h,予以尾静脉注射BMSCs 5.0×10^6;BMSCs预防组在900 mg/kg D-GalN＋10μg/kg脂多糖腹腔注射前予以尾静脉注射BMSCs 5.0×10^6;健康对照组予以0.9﹪氯化钠溶液1 ml腹腔注射。给药7 h后每组处死大鼠,检测大鼠血清ALT和AST,ELISA法检测TNF-α水平,实时定量PCR检测肝组织miRNA-155、TNF-αmRNA。各组间肝功指标差异采用方差分析,同时观察每组大鼠的24 h生存率,并用卡方检验比较各组生存率的差异。结果 D-GalN/脂多糖诱导7 h后,与ALF组相比,BMSCs预防和BMSCs治疗组大鼠ALT、AST、TNF-α水平均有所降低（P〈0.01）;同时两组肝组织TNF-αmRNA和miRNA-155表达水平均有下调（P〈0.01）;但两组间相比较差异无统计学意义。ALF组大鼠肝组织miRNA-155上调和TNF-αmRNA诱导呈正相关（r=0.734,P=0.001）。BMSCs预防组和BMSCs治疗组miRNA-155和TNF-αmRNA的部分逆转亦呈正相关（r值分别为0.687和0.590,P值分别为0.004和0.006）。给药后24 h,健康对照组、ALF组、BMSCs治疗组和BMSCs预防组大鼠死亡率组间比较差异有统计学意义（c2=19.078,P〈0.01）。结论在BMSCs干预大鼠ALF发病过程中,可以部分逆转上调的肝组织miRNA-155和TNF-α,且存在协同性,提示BMSCs治疗ALF可能通过对肝组织miRNA-155和TNF-α的调控发生作用。     

不同水分条件刚毛柽柳开花结实观测

使用参照对比方法,观测了正常水分条件(参照点)与断流30年后输水河畔不同水分梯度刚毛柽柳(Tamarix hispida)单个花序长、单个花序开花数、单个花序结实量、单个花序结实率和种子发芽率的差别.结果表明:除结实率、发芽率外,参照点与输水河畔不同水分条件刚毛柽柳的各项观测指标均存在极显著差异;应急输水7年后,离河300 m,地下水埋深值5.5 m左右,刚毛柽柳可保证一定的花序长和开花数;离河500 m,地下水埋深值6 m左右,刚毛柽柳可保证一定结实量;离河1 000 m以内,地下水埋深＜7.5 m,刚毛柽柳种子的结实率和发芽率仍相对较高;干旱条件限制刚毛柽柳的花序长与开花数,随水分条件下降又限制其结实量;在缺水条件下,刚毛柽柳仍保证一定的结实率及发芽率以确保种群的延续.     

大肠杆菌tyrR基因对aroP的表达调控

大肠杆菌的tyrR基因编码芳香氨基酸生物合成和运输途径中的一种全局性调控蛋白质,该蛋白质控制着包括自身编码基因tyrR在内的涉及苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸合成与运输的8个转录单位的转录。大肠杆菌aroP基因编码一种跨质膜主动运输芳香氨基酸的透性酶,其转录也受TyrR蛋白抑制。利用PCR反应从E.coli K12基因组中分别克隆了aroP(p)基因(携带自身的启动子)、aroP基因(不携带自身的启动子)和tyrR基因,并将它们导入苯丙氨酸生产菌E.coli WT5中。通过大细胞法检测到这3个基因的表达,并分别测定了相应的酶活力。结果:发现导入aroP(p)和aroP基因的大肠杆菌吸收苯丙氨酸的能力分别提高到原来的1．40和1．46倍,这表明利用pλPR质粒能够表达aroP基因,该质粒中的λ右向启动子(R)和aroP自身启动子(p)的表达效率几乎同样;导入tyrR基因的E．coli WT5 ATP酶活力提高到原来的1．69倍。将两种基因串联克隆在同一质粒中共表达时,携带aroP-tyr串联的大肠杆菌株运输苯丙氨酸的能力明显高于携带aroP(p)-tyrR串联的大肠杆菌株。以E．coli WT5为对照,其AroP的活性定为1,前者的Atop相对酶活力为1．31,后者为0．95,这一结果显示TyrR蛋白可能是通过与aroP基因自身启动子的结合作用来负调控aroP基因的表达。     

两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较

摘要 目的：五羟色胺（5-HT）对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要。最近新开发的iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0两类5-HT荧光探针,具有细胞特异性、反应灵敏以及高时空分辨率等显著优势,已经成为深入探究5-HT作用机制的有力工具。本研究旨在探究荧光探针iSeroSnFR和GRAB_5-HT1.0哪种能更有效地检测5-HT递质释放及动态变化,从而为后续优化5-HT荧光探针和利用这一有力工具解析神经疾病中的递质异常提供新思路。方法：将iSeroSnFR或GRAB_5-HT1.0探针的基因序列插入到Sindbis病毒表达载体,然后把病毒分别转染到培养的小鼠离体脑片的海马CA1区,比较两种探针在神经元中的表达差异;并检测其对外源性5-HT药物诱导产生的荧光反应。另外,将上述病毒转染到急性小鼠脑片中缝核（DRN）区,给与电刺激检测两种探针响应内源5-HT释放的荧光信号差异。结果：在转染iSeroSnFR的海马CA1区神经元中均有荧光表达,但细胞边界不清晰;而转染了GRAB_5-HT1.0的神经元细胞膜上表达有强烈的绿色荧光信号。用1 μM 5-HT处理培养的小鼠脑片海马CA1神经元时,iSeroSnFR探针没有明显的荧光强度变化;而GRAB_5-HT1.0探针产生的荧光强度显著增强;用1 mM 5-HT处理时,iSeroSnFR探针产生一定强度的荧光反应,但响应幅度弱于GRAB_5-HT1.0探针。另外,利用上述病毒转染急性小鼠脑片DRN区,通过电刺激诱导内源性5-HT释放,发现仅在表达GRAB_5-HT1.0探针的DRN神经元中观察到显著增强的荧光反应;而iSeroSnFR探针几乎未产生明显荧光变化。结论：在小鼠脑中,GRAB_5-HT1.0荧光探针对外源性及内源性的5-HT的亲和力更高、灵敏度更强。     

壁虎醇提物诱导人喉癌细胞Hep2凋亡的实验研究

本文研究了壁虎乙醇提取物(GEE)诱导Hep2细胞凋亡的作用.采用噻唑蓝比色法(MTT)检测了GEE对Hep2细胞增殖的抑制作用,发现GEE可呈剂量-时间依赖性的抑制Hep2细胞的增殖,GEE作用24、48、72 h后其IC50值分别为336.858、237.949、188.991 μg/mL.Hoechst 33258荧光染色后在显微镜下可观察到Hep2细胞发生了典型凋亡的形态学变化;利用Western blot法证实在Hep2细胞中GEE可诱导caspase-3和抑制VEGF蛋白的表达.这些结果表明GEE可能是通过上调Caspase-3和下调VEGF蛋白的表达诱导Hep2细胞的凋亡.     

一种新型的CRISPR/Cas9-hLacI双链DNA供体适配基因编辑系统

在CRISPR/Cas9系统介导的基因编辑中,借助于双链DNA （double-stranded DNA,dsDNA）供体模板的重组效应能够实现对目标基因组靶位点的精确编辑和基因敲入,然而高等真核生物细胞中同源重组的低效性限制了该基因编辑策略的发展和应用。为提高CRISPR/Cas9系统介导dsDNA供体模板的同源重组效率,本研究利用大肠杆菌（Escherichia coli）乳糖操纵子阻遏蛋白LacI与操纵序列LacO特异性结合的特点,通过重组DNA技术将密码子人源化优化的阻遏蛋白基因LacI分别与脓链球菌（Streptococcus pyogenes）源的SpCas9和路邓葡萄球菌（Staphylococcus lugdunensis）源的SlugCas9-HF融合表达,通过PCR将操纵序列LacO与dsDNA供体嵌合,构建了新型的CRISPR/Cas9-hLacI供体适配系统（donor adapting system,DAS）。首先在报告载体水平上对Cas9核酸酶活性、DAS介导的同源引导修复（homology-directed repair,HDR）效率进行了验证和优化,其次在基因组水平对其介导的基因精确编辑进行了检测,并最终利用CRISPR/SlugCas9-hLacI DAS在HEK293T细胞中实现了VEGFA位点的精确编辑,效率高达30.5%,显著高于野生型。综上所述,本研究开发了新型的CRISPR/Cas9-hLacI供体适配基因编辑系统,丰富了CRISPR/Cas9基因编辑技术种类,为以后的基因编辑及分子设计育种研究提供了新的工具。     

利用林间赤松毛虫卵繁殖赤眼蜂试验简报

采摘自然界林间赤松毛虫Dendrolimusspectabilis Butler卵繁殖松毛虫赤眼蜂Trichogr-amma dendrolime Matsumura,既消灭了松毛虫又解决了繁蜂的卵源。我们从1974—1977年进行了这方面的试验,现简报如下: