Ⅰ～Ⅳ型登革病毒包膜蛋白B细胞中和表位的鉴定

登革病毒包膜蛋白(Dengue virus envelope protein,DENV E)是诱导中和抗体主要的蛋白,登革病毒包膜蛋白Ⅲ区(Dengue virus envelope protein domainⅢ,DENV EDⅢ)是构建DENV亚单位疫苗的主要靶标,但是其B细胞中和表位目前了解不多。我们采用两组覆盖DENV-1EDⅢ的重叠多肽(12肽和16肽)同27株针对DENV-1EDⅢ中和单抗反应,筛选DENV EDⅢ上B细胞表位。采用该方法,我们发现了一高度保守的Ⅰ～Ⅳ型DENV共同交叉中和B细胞表位和一高度保守的DENV-1血清型特异性B细胞中和表位,分别位于DENV-1E蛋白氨基酸残基序列第309~320位和第381~392位(Amino acid residues 309~320,and 381~392;aa 309~320和381~392)。Ⅰ～Ⅳ型DENV共同交叉中和B细胞表位在Ⅰ～Ⅳ型DENV分离株中存在高度保守共同序列310 KEVAETQHGT319,DENV-1E蛋白中E309、V312、A313和V320不影响蛋白抗原性。DENV-1血清型特异性B细胞中和表位(DENV-1E蛋白氨aa 381~392)在DENV-1分离株中高度保守,在黄病毒属其它病毒中不保守。我们也发现一具有DENV-1分离株特异性的B细胞中和表位位于DENV-1E蛋白氨基酸残基序列第329~348位。这些新发现的DENV-1E蛋白EDⅢ上B细胞中和表位可能有助于研制新的DENV亚单位疫苗。     

EB病毒特异性增强子CAT报告质粒构建策略

构建携带EB病毒特异性增强子oriP不同结构域的CAT报告质粒,以探讨EB病毒特异性增强子与EB病毒核抗原-1结合后的转录增强作用。聚合酶链反应扩增得到增强子oriP全序列,借助于pUC19质粒将其不同结构域克隆到pCAT3 Promoter(pCAT3／P)载体。扩增获得oriP全序列;构建得到携带EB病毒特异性增强子Orip不同结构域的CAT报告质粒pCAT3／P-oriP、pCAT3／P-FR、pCAT3／P-DS、pCAT3／P-(FR DS),质粒中目的基因的插入方向经鉴定正确。     

内皮细胞生长因子的提取纯化和鉴定

通过CM-纤维素C50,肝素交联琼脂糖6B凝胶及高效液相色谱将内皮细胞生长因子高度纯化.结果表明,该因子分子量15 500道尔顿,等电点pH 6.0,能同时促进人脐静脉内皮细胞及L 929成纤维细胞生长.     

恒河猴静脉内皮细胞培养的研究

利用胶原酶对恒河猴血管内皮细胞进行消化,以9.92±3.34×10~3个细胞/cm~2的接种率接种于35mm培养皿中原代培养,体外培养7.7±1.82天,细胞增长了7.39±5.04倍,以1:6及1:2比例分别传第一代、第二代共历时13.89±1.36天细胞增长了147.93±88.68倍。对原代及传代细胞进行染色体及第Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检查,证实所培养的细胞为内皮细胞。通过检测培养上清中vWF和PGF1α的含量,原代、第一代与第二代之间均无明显差异(P>0.05)。