食管癌患者手术前后免疫功能改变对外周血细胞凋亡的影响

为探讨食管癌手术前后患者外周血细胞的凋亡情况。利用流式细胞仪对70例食管癌手术前及其手术后10天~14天患者外周血细胞的DNA和CD4,CD8和CD16/56含量进行了分析。结果显示:手术前后患者外周血细胞的凋亡有差异(P<0.05),但血细胞的DNA合成期细胞比率(S-phage fraction,SPE)、细胞增长指数无明显的差异(P>0.05)。两组的CD4/CD8比值或CD16/56比例有明显差异(P<0.001)。实验数据表明:手术前患者的细胞凋亡增加可能有利于平衡肿瘤细胞的恶性增殖;而外周血细胞的CD8、NK(自然杀伤细胞,natural killer cells)增高,可能有助于这种平衡作用。但手术后患者肿瘤负荷减轻,免疫功能恢复常态,细胞凋亡率相应降低。     

组织中肥大细胞内F—actin对其不同亚型细胞分泌作用的影响

目的:研究细胞内丝状肌动蛋白的变化对不同亚型肥大细胞分泌作用的影响.方法: 利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体和鬼比环肽的免疫荧光标记;以流式细胞仪检测分选人皮肤组织中肥大细胞的亚型;使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒和微丝的分布.结果:类胰蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内含有丰富的丝状肌动蛋白环,在质膜内层区域形成阻碍类胰蛋白酶释放的屏障;大量的类胰蛋白酶暂存于分泌泡中,少量的类胰蛋白酶因细胞内丝状肌动蛋白环的解聚使之从分泌泡中释放.而类胰蛋白酶和类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞及类糜蛋白酶免疫反应性的肥大细胞内少见或未见明显的阻碍蛋白酶释放的丝状肌动蛋白环;细胞形态膨胀,细胞内蛋白酶已释放.结论:人皮肤组织中肥大细胞内类胰蛋白酶和/或类糜蛋白酶的含量及其肥大细胞亚型与丝状肌动蛋白环相关联.     

顺铂靶向食管癌细胞周期Cx43表达的研究

目的:为研究顺铂治疗食管鳞癌细胞的靶向作用。方法:本研究使用流式细胞技术双变量分析检测顺铂对食管癌细胞周期进程和癌细胞周期的连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响。结果:顺铂对食管鳞癌细胞周期的影响主要作用于S期的DNA复制,细胞阻滞于S期,G2/M期减少。顺铂诱导食管鳞癌细胞周期S和G2/M期的Cx43表达的大幅度改变。低浓度顺铂(由0~2μmol/L),Cx43表达增强;顺铂渐高浓度(2~12μmol/L),细胞Cx43表达由强逐渐变弱,特别是G2/M期细胞的Cx43表达活跃,易受顺铂影响。结论:我们的研究表明以顺铂处理食管鳞癌细胞,癌细胞周期的S期和G2/M期的Cx43表达与S期的DNA复制一样可作为的潜在治疗靶标。顺铂靶向作用细胞周期S和/或G2/M期细胞的特性可能减少或避免对非分裂细胞的影响。     

用荧光图像示踪不同分化的食管癌细胞Cx43的空间分布

研究不同分化的食管癌细胞Cx43蛋白的表达和空间定位及其对食管癌细胞的生物学行为的影响。应用合适的荧光探针和激光扫描共聚焦显微镜,通过单粒子跟踪图像分析,检测Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的表达和分布。Cx43在高分化食管鳞癌EC9706中的分布与EC109细胞相似,特别是细胞膜呈现明显的荧光团;近细胞膜Cx43蛋白含量相对细胞质增高,具有在细胞膜构建细胞通信的结构基础,预示着细胞向良性发展的趋势。低分化食管鳞癌KY150细胞和食管癌SHEEC细胞中Cx43蛋白的荧光团主要分布在近核膜的细胞质中,较少分布在细胞膜附近;近核膜的Cx43蛋白含量比近细胞膜的含量高,说明Cx43蛋白在细胞质中的滞留状态。研究显示SPT图像可以直观地示踪Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的分布,从而确定Cx43蛋白在不同分化的食管癌细胞中表达及定位的痕迹。     

用免疫荧光标记对人组织中肥大细胞亚型的分选与形态观察

方法:利用中性蛋白酶成分、特征性酶抗体的免疫荧光染色和流式细胞仪确定分选肥大细胞亚型,以激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒。结果:三种免疫表型被确定:肥大细胞的类胰蛋白酶阳性(MCT)、类糜蛋白酶阴性;类糜蛋白酶阳性(MCC)、类胰蛋白酶阴性和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性(MCTC)。肥大细胞内分泌颗粒分散或聚集存在,分泌颗粒突起分泌或以分散的方式释放。分泌颗粒大范围释放后,肥大细胞的形态结构发生了改变。结论:利用肥大细胞的特征性酶抗体、免疫荧光标记和流式细胞仪可将人组织中的肥大细胞分选纯化为三种亚型;以共聚焦显微镜显示肥大细胞含有丰富的分泌颗粒,它说明肥大细胞具备了为人体I型变态反应提供快速反应的物质基础。     

流式细胞仪分析癌细胞对肥大细胞募集的影响

目的：研究食管癌细胞迁移到小鼠腹腔时肿瘤细胞周边微环境的变化。方法：将食管癌细胞株EC109和/或诱导试剂植入小鼠腹腔,利用组织化学的方法、荧光标记的肥大细胞蛋白酶和流式细胞术,我们在小鼠模型观察肠组织的形态和腹腔的MC亚型的变化。结果：胰酶导致小鼠肠道平滑肌层和黏膜下层的组织增厚,细胞间隙的增加可能有益于MC在组织移动或迁移进入腹腔;它引起小鼠腹腔液的总MC增加,MCC亚型的相对比例增加,MCT亚型减少。EC109细胞不能明显地改变小鼠肠道组织的形态,但它显著地引起腹腔MCT亚型的相对比例增加。结论：根据肥大细胞内颗粒的类胰蛋白酶和类糜蛋白酶的差异表达,可证实小鼠的MC亚型;并且不同的诱导物可能影响腹部微环境的变化。目前的研究表明,食道癌细胞可以诱导MCT（含有类胰蛋白酶）亚型迁移到小鼠腹腔,造成肿瘤细胞周围的内部环境的变化。     

变应性鼻炎鼻分泌物中细胞内DNA和RNA代谢的观测

本文介绍应变性鼻炎鼻分泌物中细胞内DNA和RNA代谢变化的观测方法。以鼻分泌物中的多种炎性细胞为实验标本,经细胞贴壁、0.1%吖橙染色标记,37℃孵育15min;采用激光扫描共聚焦显微镜对细胞内DNA,RNA形态和含量进行观测。结果表明：本方法应用于变应性鼻炎鼻分泌物细胞内DNA、RNA代谢的研究是切实可行的。     

食管癌细胞诱导肥大细胞迁移的小鼠模型

目的建立小鼠肥大细胞（mast cell,MC）迁移模型,探讨化疗药物三氧化二砷对人食管癌EC109细胞株生长的杀伤机理。方法利用肥大细胞的特征性蛋白酶抗体及其免疫荧光标记MC和PI标记EC109细胞内DNA;以流式细胞术分析小鼠腹腔液中肥大细胞各亚型的百分率及肿瘤细胞周期变化;使用激光扫描共聚焦显微镜显示肥大细胞内分泌颗粒的分布。并通过组织化学方法,观察各种诱导处理后小鼠肠组织肥大细胞由肠道向腹腔移动的变化。结果①根据流式细胞仪点图分布分析,将小鼠肥大细胞分为：类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阴性（MC T）;类糜蛋白酶阳性、类胰蛋白酶阴性（MC C）和类胰蛋白酶阳性、类糜蛋白酶阳性（MC TC）三种亚型,且T型MC明显多余TC型和C型（P〈0.05）;以共聚焦显微镜显示三种亚型的MC均含有丰富的分泌颗粒并分布于细胞膜内侧,为其出芽突起形成储备的状态。②经组织切片观察到诱导处理后小鼠肠组织MC由肠道向腹腔移动,且胰酶对MC的诱导作用大于食管癌细胞和As2O3。③经诱导迁移入腹腔的MC可能与癌细胞周期由S期向G2/M期跨越相关;As2O3能延迟食管癌细胞的G0/G1期,阻碍细胞向S期跨越,从而抑制食管癌细胞的生长。结论食管癌细胞移入小鼠腹腔,主要诱导T型MC参与免疫反应。在生物机体内环境（这里指MC影响）的条件下,As2O3对肿瘤细胞生长的作用主要表现为促使癌细胞周期的G0/G1期向S期跨越延迟,或G2/M期进入细胞分裂的延迟。     

三氧化二砷对鼻咽癌细胞Cx43表达的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)抑制鼻咽癌的作用机制。方法:采用流式细胞仪(FCM)、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)和荧光技术,检测人鼻咽癌细胞株(CNE1)经As2O3诱导后细胞连接蛋白43(Cx43)表达的变化。结果:FCM显示,经过浓度为4μmol L的As2O3处理后,其Cx43阳性细胞计数率明显升高,与未经As2O3处理和经2μmol L的As2O3处理的CNE1比较,其差异具有非常显著性意义(p<0.01);LSCM图像观察到,经4μmol LAs2O3处理后,标记Cx43的绿色荧光显著增强,集中分布于细胞膜。结论:较高剂量浓度的As2O3能提高鼻咽癌细胞Cx43的表达率,升高细胞膜Cx43的含量。As2O3抑制鼻咽癌细胞生长的作用机制之一,是通过恢复细胞间隙连接通讯功能来实现的。