高铁离子自由基与亚油酸反应的初步研究

利用停留仪快速反应动力学方法和自旋捕集ＥＳＲ技术监测高铁离子自由基和自旋捕捉剂ＰＯＢＮ的反应,发现高铁离子自由基本身不被自旋捕捉剂ＰＯＢＮ捕捉,但是ＰＯＢＮ可以捕捉到停流仪第三相中的ＯＨ,可能来自剩余的Ｆｅｎｔｏｎ试剂或高铁离子自由基的衰变。以含两个双键的不饱和脂肪酸－亚油酸（ＬＨ）作为模型化合物,测定高铁离子自由基与亚油酸分子的反应速率。ＥＳＲ结果表明,高铁离子自由基可能在一定程度上启动了亚油酸体系的脂质过氧化。     

生物系统中脂质过氧化检测方法的评述

生物体系中脂质过氧化的检测方法是脂质过氧化反应机理研究能否取得成功的关键因素之一.检测生物体系中脂质过氧化的方法有多种,但各种检测方法在不同的实验中都显示出一定的优缺点,近年来应用较多并且很有前途的实验方法是高压液相色谱法以及化学发光法等.     

乙型肝炎病毒preS基因DNA免疫小鼠诱导产生抗preS_2抗体

HBV表面蛋白的preS区具有强的免疫原性,对PreS_1特异的T辅助细胞可辅助主蛋白特异的B细胞活化增殖,克服对主蛋白的无反应性,目前带有preS区的基因工程重组疫苗正在研究当中。preS_1和preS_2区各自带有T细胞和B细胞识别位点,PreS_1(21～47)为HBV结合肝细胞受体的位点,抗preS_1(21～47)肽的抗体具有保护作用。根据preS抗原的上述特点,我们选择了preS基因,构建了pCMV_4preS和     

高铁离子自由基的直接观测

二价铁盐和过氧化氢在中性磷酸缓冲液中迅速混合时,在停流仪上可以现测到高铁离子自由基（Ｆｅｒｒｙｌｒａｄｉｃａｌ）的形成和衰变过程,从而估算出它的寿命,半衰期约为１０．３ｍｓ,改变激发波长可以得到高铁离子自由基的激发光谱,最大激发波长约在３２０ｎｍ．三价铁离子的加入对高铁离子自由基的产额有增强效应,羟自由基清除剂甘露醇则不利于高铁高子自由基的生成．通过三相混合,首先把ＯＨ表变掉,可以测定高铁离子自由基和甘露醇及苯甲酸钠的反应速率。     

一种新型微生物卤醇脱卤酶的研究进展

卤醇脱卤酶是细菌降解环境中重要污染物有机卤化物的关键酶之一,具有与其他已知脱卤酶不同的脱卤机制。它是一类通过分子内亲核取代机制催化邻卤醇转化为环氧化物的脱卤酶,可以高效催化有机邻卤醇进行脱卤反应,在治理环境污染方面具有十分重要作用。此外,在催化环氧化物和邻卤醇之间的转化反应中,卤醇脱卤酶具有很高的立体选择性,因而在手性药物合成方面也有广阔的应用前景。我们着重从卤化物生物降解途径、脱卤机制及应用等方面介绍了卤醇脱卤酶的最新研究进展,同时对卤醇脱卤酶改造的新方法进行了阐述与展望。     

黄芩甙、茜草素、茶多酚和Trolox抗氧化能力的增强化学发光研究

应用辣根过氧化物－鲁米诺－过硼酸钠－对碘酚增强化学发光体系测量了四种抗氧化剂清除苯氧自由基的能力,并与其清除超氧阴离子和抗鼠肝微粒体脂质过氧化的能力相比较,结果表明,这四种抗氧化剂在不同系统中都有明显的抗氧化能力,抗氧化剂清除苯氧自由基比清除超氧阴离子的能力更接近于抗鼠肝微粒体脂质过氧化的能力,从而提示增强化学发光法在测定抗氧化剂的抗氧化能力上有良好的应用前景。     

基于宏基因组学的卤醇脱卤酶筛选

环境中的多数有机卤化物具有高毒性和低可降解性,卤醇脱卤酶可以催化邻卤醇进行分子内亲和取代生成相应的环氧化物,在消除有机卤化物的污染方面具有十分重要的作用.此外,在催化环氧化物和邻卤醇之间的转化反应中卤醇脱卤酶具有很高的立体选择性,因而在手性药物合成方面也有广阔的应用前景.宏基因组是生境中全部微小生物遗传物质的总和,极大地扩展了微生物资源的利用空间.本文介绍了卤醇脱卤酶的特性及利用宏基因组方法筛选新的卤醇脱卤酶的两种方法及各自的优缺点.     

富集培养及高质量DNA提取有利于从土壤宏基因组中获取新卤醇脱卤酶基因

目的:宏基因组技术作为一种不依赖于微生物纯培养的新方法,在挖掘新基因方面具有极大的潜力。本研究旨在建立一种从土壤中高效获取卤醇脱卤酶新基因的策略。方法:通过对现有DNA提取方法进行改进,同时结合富集培养途径以提高土壤宏基因组DNA质量和特异性;在此基础上,应用T-Coffee及CDEHOP程序设计特异引物并对目的基因进行扩增,同时采用正交法设计优化扩增条件,以提高获得卤醇脱卤酶基因的效率。结果:应用改进法提取的DNA质量较改进前有大幅度提高,其D260nm/D280nm及D260nm/D230nm值均大于1.8,且可以不经纯化直接用于PCR和相关酶切实验;PCR扩增目标基因的特异性增强,其中用经富集培养后所得DNA为模板扩增目标基因的特异性最强,TA克隆测序阳性结果比例最高。结论:富集培养和高质量DNA的获得有助于基于宏基因组途径获取新基因。     

ADP—Fe~（2＋）启动脂质过氧化的化学发光研究

以化学发光法和雨二醛测定法为实验手段研究了ＡＤＰ—Ｆｅ２＋启动的脂质过氧化反应以及几种金属离子对该反应的影响、结果表明,当反应体系中只有ＡＤＰ－Ｆｅ２＋存在时,通过化学发光法和丙二醛测定法都可以现察到脂质过氧化反应在０—５分钟内有一“潜伏期”存在,同时在微粒体浓度保持不变的条件下,增大二价铁离子的浓度,则脂质过氧化的水平增强。如果反应体系中同时加入ＡＤＰ—Ｆｅ２＋与ＡＤＰ—Ｆｅ３＋,则反应起始时的“潜伏期”消失。当ＡＤＰ—Ｆｅ３＋、ＡＤＰ—Ａｌ３＋和ＡＤＰ－Ｐｂ２＋单独存在时本身并不启动脂质过氧化,但对ＡＤＰ－Ｆｅ２＋启动的脂质过氧化都有增强作用,并且三价铁离子对鼠肝微粒体脂质过氧化的增强作用随着ＡＤＰ－Ｆｅ２＋浓度的增大而逐渐加强。将化学发光法与雨二醛测定法的结果加以比较,发现微粒体本身对它的脂质过氧化反应过程中的发光具有猝灭作用。     

铝离子对二价铁离子启动的卵磷脂脂质体脂质过氧化的影响

利用化学发光、ＴＢＡ 反应与测量共轭二烯的方法观测了Ａｌ３ ＋ 对Ｆｅ２ ＋ 启动的卵磷脂脂质体脂质过氧化的影响。实验结果显示,在生理ｐＨ 条件下,Ａｌ３ ＋ 对Ｆｅ２ ＋ 启动的脂质过氧化有增强作用,表现为缩短潜伏期和加快脂质过氧化的反应速率, Ａｌ３ ＋ 的增强作用与脂质体中原先存在的过氧化物有关。这可能是因为在脂质体存在的条件下,Ａｌ３ ＋ 加速了Ｆｅ２ ＋ 的氧化,且加速作用与脂质体中原先存在的过氧化物的含量有关;另一方面,Ａｌ３ ＋ 可以引起脂质体的聚集,表现为浊度的增加;测量脂质体上标记的脂肪酸自旋标记物５ － Ｄｏｘｙｌ ｓｔｅａｒｉｃ ａｃｉｄ 的ＥＳＲ 波谱发现： Ａｌ３ ＋ 降低了脂质体的膜脂的流动性。研究表明： Ａｌ３ ＋ 对Ｆｅ２ ＋ 启动的卵磷脂脂质体的过氧化的增强作用可能与Ａｌ３ ＋ 加速了Ｆｅ２ ＋ 的氧化和改变了脂质体的物理状态有关