低钙浓度下血小板溶解液中肌动蛋白与肌球蛋白的相互作用

当低浓度的Ca~(++)加入到血小板溶解液时(Ca~(++)/EGTA=0.56,游离Ca~(++)=1.22×10~(-7)mol/L),立即形成白色沉淀。这种沉淀经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定为肌动蛋白、肌球蛋白和某些未知蛋白的复合物。沉淀的形成与钙的浓度有关。当Ca~(++)浓度从9.94×10~(-9)mol/L逐渐上升至1.22×10~(-7)mol/L时,溶液的浊度也逐步上升。当血小板溶解液事先与三氟拉嗪或氯丙嗪(50μmol/L)保温,然后再加入Ca~(++)时,白色沉淀同样形成,浊度与Ca~(++)浓度的关系曲线也保持不变。在游离Ga~(++)浓度为2.2×10~(-8)mol/L时,血小板溶解液生成沉淀的时间过程也不受钙调蛋白抑制剂的影响。药物对沉淀的Mg~(++)-ATPase活力有轻微抑制作用。这些结果表明,在休止血小板细胞中(游离Ca~(++)浓度10~(-7)mol/L),大部分肌动蛋白已与肌球蛋白和其他一些未知蛋白形成复合物。在复合物中肌动蛋白以F-型存在。     

胰岛素对大鼠肝脏和血浆脂质代谢的影响

正常大鼠皮下注射胰岛素后血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)显著下降(P<0.01、P<0.001和P<0.01),(血清HDL-C)/(血清TC)和(血清HDL-C)/(血清TC-(HDL-C))无变化,离体灌流肝脏分泌TC和TG显著增加(P<0.001,P<0.05)。这些结果提示:(1)胰岛素使血清HDL-C和较低密度脂蛋白[极低密度脂蛋白(VLDL) 低密度脂蛋白(LDL)]-胆固醇同等比例下降。(2)胰岛素促进正常大鼠肝脏合成分泌TG(VLDL-TG)增加和血浆TG(VLDL-TG)清除增加,可能以后一作用为主。(3)胰岛素促进正常大鼠肝脏合成分泌胆固醇增加和血浆胆固醇清除增加,可能以后一作用为主。(4)胰岛素使正常大鼠血清HDL-C下降,可能是由于激活LDL受体促进大鼠HDL通过LDL受体途径的分解代谢和/或激活肝内皮脂酶(HEL)促进HDL分解的结果。     

一种简易的大鼠离体肝脏灌流装置

参照Miller等人的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含0.15%葡萄糖的Krebs-Ringer碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2～3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%O_2-5%CO_2。灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。     

HDL受体和肝性脂酶在肝选择性摄取HDL_2－CE中的协同作用

体外重组３Ｈ－ＣＥ－无ＡｐｏＥ－ＨＤＬ２（ｒＨＤＬ２）保持天然ＨＤＬ２生物活性。大鼠肝窦状隙细胞与ｒＨＤＬ２３７℃培养３ｈ（正常组）;细胞内吞ｃｐｍ为９９５±１４７（ｘ±Ｓ．Ｄ．,ｎ＝２）。细胞进一步９７℃培养２ｈ．释放三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀和ＴＣＡ上清液中ｃｐｍ为７８±３２和１２±９。Ｎ－乙酰咪唑修饰组为３３９±６２、１９±１１和９±５。肝素处理组为５４２±７８、３４±１４和９±８。实验结果提示：（１）肝窦状隙细胞通过ＨＤＬ受体内吞ＨＤＬ２摄取ＨＤＬ２－ＣＥ,并通过逆向胞饮将ＨＤＬ３排出体外．（２）肝性脂酶（ＨＬ）直接介导细胞选择性摄取ＨＤＬ２－ＣＥ,导致ＨＤＬ３生成．（３）ＨＬ和ＨＤＬ受体在介导细胞选择性摄取ＨＤＬ２－ＣＥ中具有协同作用。     

我国正常成年学生血液化学成分的测定

血液化学成分的常数是檢查人体健康与营养状况以及诊断疾病的重要参考资料。测定我国人民血液化学成分的常数,以林樹模的报告为最早,测定的项目与人数也较多。但作者未曾严格规定条件作为血样品选择的标准。我们考虑到年龄、性别、营养与其他有关健康的条件,选出我医学院中正常成年学生数百人这血样品供给者,进行了15种血液成分的测定:血清总蛋白、白蛋白与球蛋白、纤维蛋白元、非蛋白氮、脲氮、尿酸、肌酸与肌酐、血糖、血清总胆固醇、胆固醇酯、游离胆固醇、钙与无机磷。这些工作是1955     

氧化HDL_2在大鼠肝窦状隙细胞内代谢

大鼠肝窦状隙细胞培养结果显示：氧化高密度脂蛋白２（ｏｘ－ＨＤＬ２）对异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）荧光标记ｏｘ－ＨＤＬ２的细胞结合有竞争抑制作用,而ＨＤＬ２则无。细胞内吞ＦＩＴＣ－ｏｘ－ＨＤＬ２的荧光强度（ＦＳ）和［３Ｈ］ＣＥ－ｏｘ－ＨＤＬ２（ｒ－ｏｘ－ＨＤＬ２）的放射强度分别是内吞ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２的４５．５％和ｒＨＤＬ２的６１．４％。内吞ＦＳ主要存在于三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀部分,而放射强度主要存在于ＴＣＡ上清液部分。细胞释放的ＦＳ和放射活性分别是内吞量的６７．７％和１０．９％,且主要存在于ＴＣＡ可沉淀部分。结果提示：（１）大鼠肝窦状隙细胞可能存在着ｏｘ－ＨＤＬ受体,该受体不同于ＨＤＬ受体。（２）ｏｘ－ＨＤＬ２在细胞内代谢方式与ＨＤＬ２相似,均没有经历溶酶体分解途径。在细胞内载脂蛋白与胆固醇酯（ＣＥ）组分经历一个解离过程。细胞截留大部分ＣＥ后,将载脂蛋白（Ａｐｏ）与剩余ＣＥ重组成脂蛋白并以逆向胞饮方式释放到胞外。（３）氧化修饰减弱ＨＤＬ２逆向转运胆固醇能力     

胰岛素对大鼠肝内皮细胞脂酶活性的影响

肝性甘油三酯脂酶分布在肝窦内皮细胞表面,故又称肝内皮细胞脂酶(HEL)。已证实肝素可使大鼠的HEL释放。Nikkila和Kuusi等研究指出HEL对高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-c)的清除起重要作用,是HDL分解代谢的关键酶。为了深入了解胰岛素对脂质代谢的影响,我们研究了胰岛素对正常大鼠HEL活性的影响。实验动物为200～250g正常雄性大鼠。     

应用气相色谱法测定人血清总胆固醇

对高脂血症的临床诊断、生理、生化、病理的研究或新药的研究中,都需要测定血中胆固醇。但现用各种比色法均不够灵敏,操作又费时。为此,很有必要寻找一种高灵敏、高分辨及快速的胆固醇测定法。近年来,国外不少学者采用气液相色谱法测定,该法快速,但还存在手续麻烦和灵敏     

一种简易的大鼠离体肝脏灌流装置

参照Miller等人n 0]的大鼠离体肝脏灌流方法,我们设计制作了一套灌流装置,此装置由三部分组成:超级恒温器(维持灌流系统恒温用)、气体交换系统及灌流仪(用有机玻璃制作:上部有加热弯管,肝门静脉插管,温度计及恒温水浴夹层;下部有放置肝脏的漏斗和平板、灌流室、胆汁引流管、通气口及恒温水浴夹层)。用含O.15%葡萄糖的Krebs-Ringor碳酸氢盐缓冲液为灌流介质,流速2—3毫升/分钟/克肝,灌流4小时,在灌流期间持续通入95%Or-5?20灌流后肝脏无坏死灶出现,肝切片显微观察,结构基本正常。通过胆汁分泌量及耗氧量测定,证明本法可维持肝脏正常功能至少4小时。我们将灌流液浓缩后,作脂质测定及脂蛋白电泳分析:总胆固醇为0.062±0.008毫克/克肝(n=7,p=95%);有一条相当于大鼠血清极低密度脂蛋白(VLDL)及两条相当于高密度脂蛋白(HDL)的色带。本装置构造简单,保证恒温,流速较稳定,适用于物质代谢及其调节与药物代谢的研究。目前,我们已将此法用于大鼠肝脏脂质代谢、脂蛋白代谢及肝脏肝素可释放脂酶活性的研究(均见另文)。     

一种测定血脂的简便方法——薄层层析法

用石油醚:乙醇(2:1)抽提样品中脂质,点样在硫酸铵硅胶板上,用石油醚:乙酸:冰醋酸(82:18:1V/V)展开。在180℃烘烤使硫酸铵分解产生硫酸,碳化脂质而显色。用薄层层析扫描仪扫描。测得游离胆固醇回收率为99.5±3.29,重复性试验CV为1.54％。10例正常人血清中游离胆固醇为51.27±9.94,胆固醇酯为128.3±17.85,总胆固醇为179.7±25.53,甘油三酯为132±51.93。本法具有稳定、简便、安全、准确、灵敏及可同时测得多种血脂等优点。可用于科研及临床研究。