利用带有原核增强子样序列的新型载体在大肠杆菌中高效表达人α肿瘤坏死因子

将去除信号肽的人肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)cDNA插入到带有原核增强子样序列Px的新型表达载体pBV320中,使TNF cDNA 5′端直接置于大肠杆菌trp启动子下游,采用37℃恒温培养,使TNF在大肠杆菌中获得了高效表达,表达活性达1.35(±0.17)×10~6U/L菌液。表达的TNF-α对L929细胞的毒性作用可被抗人肿瘤坏死因子-α的单克隆抗体所中和。表达菌裂解液作SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,显示有一条分子量与TNF分子量吻合、约为17000道尔顿的蛋白带。利用DEAE-Sepharose阴离子交换层析及Sephacryl S-200凝胶过滤对上述重组人TNF-α进行纯化,获得电泳纯产品,比活性为1.48×10~6U/mg。     

人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因的修正及修正基因在大肠杆菌中的表达

本文采用寡核苷酸介导的定位诱变技术修正了人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8合成基因中出现的合成错误,在该基因编码区的201位插入了原来缺失的G残基,从而使之恢复正确读框。经对修正基因进行DNA全序列测定,表明定位诱变的结果符合设计要求。在此基础上,利用原核高效表达载体pBV220在P_RP_L串联启动子的控制下在大肠杆菌中对该基因进行了表达,并测定了重组人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8的嗜中性白细胞趋化活性。本工作为开展人嗜中性白细胞活化蛋白-1/白细胞介素-8基因工程及蛋白质工程的研究奠定了基础。     

用扁桃体淋巴细胞生产白细胞干扰素的研究

本文报告了用手术切除的正常人新鲜扁挑体细胞制各白细胞干扰素,较适宜的条件是扁桃体在离体后8小时内应用,以1640作为培养液,按每毫升含10个活细胞、200IC粗干扰素起动、128HA的NDV诱导培养18—24小时,pH不低于7.0,能较稳定地获得效价平均>40,000IU／ml 的粗干扰素。因粗干扰素效价较高,用KcNs一乙醇法进行一次纯化,部分纯品的比活性即可>10。IU／mg蛋白,回收率50—60％,产品的各项生物制品指标均符合美国NIH标准。一颗新鲜扁挑体一般可得到200—500×107个活淋巴细胞,约相当于400—1,000ml血所分离得到的白细胞量,这在一定程度上解决了血源困难和价格昂贲的问题,扩大了生产白细胞干扰素的细胞来源。