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为探讨脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种经Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)介导的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)诱导THP-1巨噬细胞内肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和白细胞介素8(interleukin 8,IL-8)表达的相关分子机制,本研究将脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种感染THP-1巨噬细胞,细菌与巨噬细胞最佳感染之比为感染复数(multiplicity of infection,MOI)＝3,用荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测THP-1巨噬细胞感染两细菌亚种6 h后的胞内TNF-α和IL-8 mRNA水平,以及分别阻断TLR2、JNK 和ERK信号蛋白后TNF-α和IL-8 mRNA水平的变化。结果显示,脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种作用于THP-1巨噬细胞6 h后,均可诱导细胞内TNF-α和IL-8 mRNA水平显著上调,差异有统计学意义(P＜0.05);分别阻断TLR2、JNK和ERK信号蛋白,脓肿亚种感染THP-1巨噬细胞后胞内TNF-α和IL-8 mRNA上调水平出现明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.05);分别阻断TLR2和JNK信号蛋白,马赛亚种感染THP-1巨噬细胞后胞内TNF-α和IL-8 mRNA上调水平均出现明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.05);而阻断ERK信号蛋白后,马赛亚种组仅见IL-8 mRNA水平明显抑制,差异有统计学意义(P＜0.05),而TNF-α mRNA水平未见明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究提示,脓肿分枝杆菌脓肿亚种和马赛亚种均可作用于TLR2,诱导THP-1细胞内TNF-α和IL-8 mRNA水平上调,脓肿亚种可经JNK和ERK信号蛋白诱导TNF-α mRNA上调,马赛亚种可经JNK信号蛋白诱导TNF-α mRNA上调;脓肿亚种和马赛亚种诱导IL-8 mRNA上调可能与JNK和ERK信号蛋白相关。 相似文献
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创伤弧菌溶细胞素融合蛋白重组、表达与细胞毒活性鉴定 总被引：3，自引：2，他引：1
研究重组创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,human ECV304)凋亡的作用.诱导含pET-28a( )vvhA重组质粒的BL21大肠杆菌表达创伤弧菌溶细胞素融合蛋白,应用Ni2 亲和层析方法对rVvhA进行纯化:利用分步稀释加透析相结合的方法进行蛋白质复性;绵羊红细胞裂解试验对复性后的rVvhA进行溶血活性初步测定:MTT法检测rVvhA对人ECV304细胞的体外毒性作用:应用Hochest33342/PI活细胞荧光双染及流式细胞术分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响.结果显示,用Ni2 -NTA His Band亲和层析柱纯化rVvhA纯度达88.6%左右;复性后的rVvhA有一定的溶血活性,其溶血活性具有时间.剂量依赖性;MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0 HU/ml rVvhA作用人ECV304 12 h后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5 HU/ml rVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0 HU/ml rVvhA处理组加用40μmol/L caspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0 HU/ml rVvhA处理组有一定程度降低.rVvhA对人ECV304细胞具有诱导凋亡的生物学活性,推测诱导调亡途径可能与caspase家族有关. 相似文献
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