Cell-SELEX技术为基础的靶向药物递送系统研究进展

Cell-SELEX技术是在指数富集的配体系统进化(SELEX)技术的基础上,获取能与特定靶细胞结合的适配体的方法。将Cell-SELEX技术获得的适配体与各类药物分子或分子纳米材料等相结合构成复合物,可构建不同的靶向药物递送系统。这类药物递送系统利用适配体的靶向性,将药物分子等特异地递送到相应的靶细胞,从而达到诊断、治疗疾病、提高药物浓度或者降低毒副作用等目的。本文简要介绍了Cell-SELEX技术的发展现状及目前主要的靶向药物递送系统的应用。     

低氧对间充质干细胞成骨相关基因表达的影响

目的：观察低氧对间充质干细胞（MSC）成骨相关基因表达的影响。方法：取第2代MSC,分别在常氧和3％氧浓度下培养,采用real-timeRT-PCR检测骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α1（Cbfal）、骨形态发生蛋白（BMP）和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA的表达。结果：2种氧浓度下MSC的形态无明显差异,但3％氧浓度下MSC集落形成能力增强。常氧下MSC中Cbfal和BMPmRNA的表达高于3％氧浓度,差异有显著性（P〈0．05）;而OPN和VEGFmRNA的表达虽高于3％氧浓度,但差异无显著性（P〉0．05）。结论：3％氧浓度对MSC的形态没有明显影响,但增强其增殖能力,抑制其成骨分化能力。     

营养动脉结扎和液氮冷冻对股骨头内局部氧分压的影响

目的：观察营养动脉结扎和液氮冷冻对股骨头内局部氧分压的影响,为后期制作极度低氧股骨头缺血坏死模型打下基础。方法：9只雄性大耳白兔随机平均分为对照组、液氮冷冻组和动脉结扎＋液氮冷冻组,对照组动物不做任何处理,液氮冷冻组动物行股骨头液氮冷冻使其发生缺血坏死,动脉结扎＋液氮冷冻组动物先结扎旋股内外侧动脉,再对股骨头进行液氮冷冻。造模后立刻活体观察股骨头内氧分压变化。结果：液氮冷冻组股骨头内氧分压较对照组下降一半左右,2组比较有显著性差异（P〈0．05）;动脉结扎＋液氮冷冻组动物股骨头内氧分压进一步下降到对照组的1／8左右,与其他2组相比有显著性差异（P〈0．05）。结论：液氮冷冻和旋股内、外侧动脉结扎均可明显降低股骨头内氧分压,两者合用具有重叠效应,可共同促使股骨头内氧分压下降。     

重组腺病毒CXCL12基因表达载体的构建及其转染间充质干细胞后对其Runx2基因表达的影响

目的:构建趋化因子CXCL12的重组腺病毒表达载体,观察其对间充质干细胞(MSC)中成骨特异性转录因子Runx2表达的影响。方法:将目的基因CXCL12全长c DNA模板进行PCR扩增、酶切后与p HBAd-MCMV-GFP载体结合,获得p HBAd-MCMV-CXCL12-GFP重组载体;将重组载体和包装质粒共转染HEK293细胞进行包装、扩增;利用所携带的绿色荧光蛋白基因测定病毒滴度,观察基因转染效率,QPCR和Western印迹检测CXCL12重组腺病毒转染后MSC中CXCL12和Runx2的表达。结果:酶切、PCR及测序结果证实CXCL12重组腺病毒载体构建成功,转染MSC后CXCL12和Runx2的表达明显升高,AMD3100可以降低CXCL12基因转染后MSC中Runx2的表达。结论:趋化因子CXCL12和MSC表面的CXCR4结合对MSC中成骨特异性转录因子Runx2的表达具有促进作用。     

成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒质粒的构建与鉴定

目的:构建成骨细胞特异性转录因子——核心结合因子α1(Cbfa1)重组腺病毒载体,为后期应用Cbfa1基因治疗股骨头坏死、骨折和骨缺损等疾病奠定基础。方法:以目的基因Cbfa1全长cDNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆到pShuttle-CMV载体的相应酶切位点,获得目的基因载体pShuttle-CMV-Cbfa1,在大肠杆菌BJ5183中和pAdEasy-1同源重组,筛选阳性克隆,经酶切、PCR及测序鉴定,线性化后用脂质体法转染HEK293细胞进行包装、扩增,用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,酚氯仿抽提纯化病毒,AdEasy1/Cbfa1感染间充质干细胞(MSC)后检测Cbfa1的表达。结果:测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功,AdEasy1/Cbfa1感染MSC后Cbfa1的表达显著升高。结论:构建了含Cbfa1基因的重组腺病毒载体,该基因能促进MSC向成骨细胞分化,预示其可作为治疗基因应用于股骨头坏死、骨折和骨缺损的治疗。