过表达miR-455抑制宫颈癌细胞SiHa的生长

研究表明,microRNA(miRNA)可作为癌基因或抑癌基因发挥功能、调控细胞增殖和凋亡等生物学行为,与肿瘤的发生发展密切相关. 在本研究中,我们检测了miR- 455在宫颈癌组织中的表达变化及其对宫颈癌SiHa细胞生物学功能的影响. Real- time PCR实验结果显示,miR-455在宫颈癌组织样本中较正常宫颈组织表达明显降低. 瞬时转染miR-455 mimics使其在SiHa细胞中过表达. CCK-8及流式细胞术分析显示, 过表达miR-455明显抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,导致细胞G1/S期阻滞. Real- time PCR分析显示,PI3KR1,BCL2L2 mRNA明显降低.上述研究结果表明, miR-455可显著降低SiHa细胞存活能力,是一个潜在的抑癌基因.     

抑制LRP16基因的表达显著下调TNF-α介导的NF-κB转录活性

LRP16是1个雌激素(E2)通过其受体α(ERα)诱导表达的靶基因.研究表 明,LRP16可以作为多种核受体（包括AR、ERα）的转录共激活因子.采用荧光素酶报 告检测显示,抑制LRP16基因表达显著削弱了TNF-α(10 ng/mL)介导的NF-κB转录活性;采用免疫荧光和Western印迹法研究抑制LRP16对NF-κB/p65亚基核转位的影响,结果显示,抑制LRP16表达并不能参与影响p65亚基核转位．上述结果提示,LRP16可能以核激活因子角色参与了NF-κB介导的信号途径．RT-PCR实验检测抑制LRP16基因表达对TNF-α诱导NF-κB靶基因调控作用,检测的靶基因包括IκB、A20、IL-8、 FLIP、XIAP.结果表明,在这些靶基因中只有XIAP、cIAP2产生了明显的下调趋势. 因此,LRP16是NF-κB的1个共激活因子,通过调控NF-κB与靶基因的结合能力,从而增强了NF-κB的转录活性.     

GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位

目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。     

GST-pulldown体外研究LRP16与NF-KB/p65相互作用的功能表位

目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位.方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamH Ⅰ/Xho Ⅰ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用.结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用.结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位.     

不停跳心内手术对先天性心脏病患者肺功能的保护作用

目的:探讨不停跳心内直视手术对先天性心脏病(Congenital Heart Diseases,CHD)患者肺功能的保护作用。方法:将35例CHD患者按入院时的奇、偶数顺序随机分为停跳组(n=18)和不停跳组(n=17);患者均于CPB前及手术后1h查血气分析,监测呼吸指数(Respiratory Index,RI)及动脉血氧分压(Arterial Partial Pressure of Oxygen,PaO2)。结果:术后1h两组的RI均较术前升高,不停跳组的RI明显低于停跳组(P<0.05);术后1h不停跳组的PaO2明显高于停跳组(P<0.05)。结论:不停跳心内直视手术对CHD患者肺功能具有较好的保护作用。     

激光显微切割技术用于子宫内膜异位组织DNA的提取及其完整性分析

目的：探索一套激光显微切割（LCM）分离子宫内膜异位症腺体细胞后提取微量DNA并进行完整性分析的操作流程。方法：分别对20例石蜡标本及20例冰冻标本进行LCM,收集切割后的腺体细胞;2组标本各取10例提取微量DNA,检测DNA浓度并通过PCR扩增进行验证;余20例标本分别进行全基因组扩增,检测产物浓度并利用8种常见管家基因作为引物通过PCR扩增进行验证,对比分析其结果。结果：石蜡标本与冰冻标本在LCM获取腺体细胞及提取微量DNA两个环节中均可获得满意效果;但经全基因组扩增后,石蜡标本无法保留完整DNA信息。结论：LCM获取子宫内膜异位症腺体细胞提取微量DNA是一种操作简单、结果稳定的方法,可作为日后子宫内膜异位症基因组研究的常规方法;冰冻切片相对石蜡切片,更能保留完整的DNA信息。     

加拿大披碱草与2种国产披碱草杂种F1愈伤组织诱导及植株再生研究

对加拿大披碱草×披碱草F1和加拿大披碱草×圆柱披碱草F1的幼穗外植体愈伤组织诱导及植株的再生进行了研究.试验筛选出2个杂交种愈伤组织诱导的最适培养基均为:MS 400 mg/L CH 3.0 mg/L 2,4-D;最适继代培养基为MS 400 mg/L CH 1.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L 2,4-D;最适幼苗分化培养基为:MS 400 mg/LCH 3.0 mg/L 6-BA 0.5 mg/L NAA;最适生根培养基为:MS 0.5 mg/L NAA 0.5 mg/L IBA.这一组培体系的建立,为2个种间杂交种的种质保存及利用奠定了基础.     

LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立简

目的：构建靶向LRPl6基因的短发夹RNA（shRNA）慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法：构建pWPT-U6-LRPl6shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果：构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100％感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论：构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。     

LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB活性

目的:研究LRP16在电离辐射激活核转录因子NF-κB信号转导通路中的作用。方法:在HeLa细胞中,分别运用双萤光素酶分析和Western印迹检测LRP16对κB-Luc报告基因及NF-κB下游靶基因表达的影响。结果:双萤光素酶实验证实LRP16过表达促进电离辐射诱导的κB-Luc活性,而抑制LRP16则降低电离辐射诱导的κB-Luc活性;Western印迹结果显示,LRP16过表达促进电离辐射诱导NF-κB的下游抗凋亡基因XIAP的表达,与之相对应的是,抑制LRP16降低电离辐射诱导NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达。结论:LRP16可以调节电离辐射诱导NF-κB的转录活性,并且调控NF-κB下游抗凋亡基因XIAP的表达,为进一步阐明电离辐射激活NF-κB转录活性的分子机制奠定了基础。     

HeLa细胞中LRP16影响电离辐射诱导的NF-κB核转位

前期研究显示抑制LRP16的表达可以明显增加肿瘤细胞对辐射诱导凋亡的敏感性,但具体机制尚不清楚．大量研究表明,NF-κB信号通路在肿瘤产生辐射抵抗中起着重要的作用. 为研究LRP16影响肿瘤细胞对辐射敏感性的可能机制,首先通过免疫 荧光技术检测电离辐射刺激后不同时间点NF-κB的核转位情况;然后分别过表达和抑制LRP16的表达,采用Western印迹方法检测NF-κB在核蛋白与浆蛋白中的表达情况、 IκB-α总体蛋白水平及磷酸化水平．结果发现,电离辐射后1 h,可见NF-κB明显入核;过表达LRP16可以促进NF-κB入核、提高IκB-α的磷酸化水平、促进IκB-α 的降解;反之,抑制LRP16的表达可以抑制NF-κB入核、降低IκB-α的磷酸化水平、 阻碍IκB-α的降解．上述研究结果表明,在HeLa细胞中LRP16可以影响电离辐射诱导的NF-κB核转位,该研究为LRP16参与肿瘤细胞产生辐射抵抗现象提供一种可能的机制．