拟南芥中柯浩体蛋白Atcoilin的克隆、表达及纯化

旨在制备柯浩体的标志蛋白——Atcoilin蛋白,利用pET-28a与目的基因构建重组表达质粒,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,产物用SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定。通过分别改变IPTG的浓度、培养时间、培养温度等来优化Atcoilin蛋白的表达条件。表达出的重组蛋白经过镍柱、分子筛进行纯化。结果显示,原核表达载体pET28a-At1g13030成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相应的重组蛋白经Western blotting鉴定正确。在IPTG浓度为0.7 mmol/L,18℃培养20 h的条件下,目的蛋白表达量最高。经过SDS-PAGE分析鉴定,过镍柱、分子筛后得到的重组蛋白纯度较高。     

人源STK3蛋白截短突变体的克隆、表达及纯化

人源STK3蛋白(serine/threonine-protein kinase 3)是一种促凋亡激酶,能与多种肿瘤相关蛋白相互作用,主要功能为应激活化,能入核介导染色质凝集,导致核小体间DNA碎片化.为了进一步研究STK3蛋白结构与功能,对其进行了克隆、蛋白提取及纯化.由于在表达全长STK3蛋白时很难获得可溶性表达蛋白,基于此蛋白序列特点设计了6个STK3蛋白截短突变体,对其进行克隆、表达及纯化,最终得到了纯度较高的STK3蛋白C端截短突变体(327-491),为下一步进行蛋白结晶和结构测定奠定基础.